律 涛，刘 敏，贾海红，郎书会，樊淑彦*(.河北医科大学药学院实验中心，河北 石家庄 05007；.河北医科大学药学院分析化学教研室，河北 石家庄 05007)

·论著·

反相高效液相色谱法测定决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚的含量

律 涛1，刘 敏2，贾海红2，郎书会2，樊淑彦2*
(1.河北医科大学药学院实验中心，河北 石家庄 050017；2.河北医科大学药学院分析化学教研室，河北 石家庄 050017)

目的建立测定决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚含量的反相高效液相色谱法(reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法采用RP-HPLC测定大黄素和大黄素甲醚的含量。色谱柱为Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-四氢呋喃-1%磷酸(84∶7∶9)；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；检测波长为254nm；进样量20μL。结果在选定的色谱条件下大黄素和大黄素甲醚的保留时间分别在6.9min、11.8min，具有良好的分离度和稳定性。大黄素回归方程为Y=3.31×104X-4.63×103(R=0.999 7)，进样量在3.12～9.4mg/L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，样品回收率为102.1%，相对标准差(relative standard deviation,RSD)值为1.7%(n=9)；大黄素甲醚回归方程为Y=2.35×104X+8.80×103(R=0.999 8)，进样量在2.10～10.5mg/L范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，样品回收率为104.7%，RSD值为1.3%(n=9)。结论RP-HPLC操作可靠、准确，适用于决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚的含量测定。

色谱法，高压液相；决明降脂片；大黄素；大黄素甲醛

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.08.014

决明降脂片是由决明子、茵陈、何首乌、桑寄生、维生素C、维生素B2、烟酸组成，具有降血脂、降血清胆固醇功能，用于冠状动脉粥样硬化性心脏病或慢性肝炎所引起的高脂血症、血清胆固醇增高症[1]。目前，国内已报道反相高效液相色谱法(reversedphasehighperformanceliquidchromatography,RP-HPLC)法对决明降脂片中维生素C、维生素B2和烟酸的含量测定[2-4]，薄层色谱法对其中的何首乌、桑寄生、茵陈、决明子进行定性鉴别，RP-HPLC法对决明子、何首乌中的大黄素以及何首乌中活性成分2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖的含量测定，但未见对大黄素甲醚进行测定。本研究采用RP-HPLC法同时对决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚进行含量测定，现将结果报告如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪，LC98-Ⅱ型，UV98-Ⅱ可变波长紫外可见分光检测器，P98-Ⅱ高压输液泵，T-98型柱温箱，北京温分分析仪器技术开发有限公司；N-2000双通道色谱工作站，浙江大学智能信息工程研究所；TU-1901双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；决明降脂片，通化鸿茂药业有限公司，批号120501；大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，均购于中国药品生物制品检定所(批号110756-200110、110758-200610)；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：KromasilC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相，甲醇-四氢呋喃-1%磷酸(84∶7∶9)；柱温，室温；流速，1.0mL/min；检测波长，254nm；进样量，20μL；大黄素和大黄素甲醚的保留时间分别在6.9min和11.8min(图1)。

图1 决明降脂片中大黄素、大黄素甲醚的RP-HPLC色谱图

A.对照品；B.样品；C.阴性对照

Figure1RP-HPLCofemodinandphyscionofJuemingJiangzhiTablets

A.Referencesubstances;B.Samples;C.Thesamplewithoutemodinandphyscion

2.2 系统适应性实验：在上述色谱条件下，大黄素和大黄素甲醚与相邻杂质峰分离良好(分离度均>1.5)，理论塔板数不低于3 000。供试品中大黄素和大黄素甲醚的色谱峰与相邻色谱峰均达到基线分离。

2.3 专属性实验：在上述色谱条件下，对阴性对照品溶液进样分析，将所得色谱图与样品色谱图进行比较，可见决明降脂片中其他物质对待测组分含量测定不构成干扰[5-6]。

2.4 供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，称质量，计算平均片质量，研细，精密称定约0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入95%乙醇25mL，称定质量，超声处理30min，取出，放冷，再称定质量，用95%乙醇补足减失的量，精密量取10mL，水浴挥干乙醇，残渣用色谱甲醇溶解，定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.5 对照品溶液的制备：分别精密称取大黄素和大黄素甲醚对照品适量，各置25mL量瓶中，用色谱甲醇超声溶解并定容，得大黄素对照品溶液浓度为51.2mg/L，大黄素甲醚对照品溶液浓度为105mg/L，作为混合对照品溶液。

2.6 标准曲线的制备：精密量取2.00、3.00、4.00、5.00、6.00mL混合对照品溶液分别置10mL量瓶中并稀释至刻度，得到一系列质量浓度溶液。按上述色谱条件进样，进样20μL，记录峰面积。以对照品进样量(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。大黄素回归方程为Y=3.31×104X-4.63×103(R=0.999 7)(n=5)，大黄素在3.12～9.4mg/L范围内呈良好的线性关系；大黄素甲醚回归方程为Y=2.35×104X+8.80×103(R=0.999 8)(n=5)，大黄素甲醚在2.10～10.5mg/L范围内呈良好线性关系。

2.7 精密度：精密吸取对照品溶液，重复进样5次，每次进样20μL，测定峰面积积分值，计算相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)值。大黄素RSD为0.62%，大黄素甲醚RSD为0.62%，均<2.00%，表明精密度良好。

2.8 稳定性：取供试品溶液，按上述色谱条件分别在0、2、4、8、12h测定峰面积。测得大黄素峰面积RSD为2.4%，大黄素甲醚峰面积RSD为1.5%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.9 重复性：取同一批样品(批号120501)5份，按“2.4”项下制备并测定。计算大黄素峰面积RSD为0.81%(n=6)，大黄素甲醚峰面积RSD为1.7%(n=6)，实验表明重复性良好。

2.10 加样回收率：精密称取已知含量的9份决明降脂片0.5g，按80%、100%、120%低、中、高3种浓度分别加入等量的大黄素和大黄素甲醚混合标准品溶液，按“2.4”项下方法制备并测定，计算大黄素平均回收率为102.1%(n=9)，RSD为1.7%，大黄素甲醚平均回收率为104.7%(n=9)，RSD为1.3%。

2.11 最低检测限：在信噪比≥3时，最低检测限分别为大黄素0.624mg/L，大黄素甲醚3.88mg/L。

2.12 样品测定结果：取决明降脂片样品(批号120501)3份，按“2.4”项下方法制备并测定。3份样品中大黄素的含量分别为0.370、0.369、0.378mg/g，大黄素甲醚的含量分别为0.266、0.258、0.268mg/g。

3 讨 论

3.1 提取工艺的确定：考察了不同浓度的乙醇对样品提取率的影响，分别用25%、50%、75%、95%、100%的乙醇进行提取，结果表明低浓度的乙醇提取不完全，无水乙醇提取效果很差，故选择95%乙醇作为提取溶剂[7]。样品分别用10、20、30、40、50min超声处理，考察结果表明超声30min后，2种指标成分已基本提取完全，各成分的含量无明显变化，所以选择超声30min为最佳提取时间[8]。

3.2 检测波长的确定：据文献[9-11]报道，大黄素和大黄素甲醚在紫外检测中的最大吸收波长均254nm，为了提高各成分的检测灵敏度且能被同时测定，用254nm检测时各成分峰形最佳，分离度好，故选择254nm为检测波长。

3.3 流动相的选择：改变流动相中甲醇、1%磷酸缓冲液和四氢呋喃的配比，分离效果理想且流动相处理方法简单易行，因此确定流动相为甲醇-四氢呋喃-1%磷酸(84∶7∶9)[12]。

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(本文编辑：许卓文)

REVERSEDPHASEHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYFORDETERMINATIONOFEMODINANDPHYSCIONINJUEMINGJIANGZHITABLETS

LVTao1,LIUMin2,JIAHaihong2,LANGShuhui2,FANShuyan2*
(1.LaboratoryCenter,theSchoolofPhamacy,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,China;2.DepartmentofPhamacuticalAnalysis,theSchoolofPhamacy,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,China)

ObjectiveToestablishareversedphasehighperformanceliquidchromatography(RP-HPLC)methodfordeterminationofemodinandphyscioninJuemingJiangzhiTablets.MethodsRP-HPLCsystemwascarriedoutonKromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)columnwithamobilephase,thestandardsandsampleswereseparatedusingagradientmobilephaseconsistingofmethanol,tetrahydrofuranand1%phosphoricacid(84∶7∶9).Thecolumntemperaturewas25℃andtheflowratewas1.0mL/min.Thenuciferinewasdetectedatthewavelengthof254nm.Theinjectionvolumewas20μL.ResultsEmodinandphyscionwereseparatedfromimpuritieswellanditsretentiontimewasatabout6.9min,11.8min.RegressequationwasY=3.31×104X-4.63×103(R=0.999 7).Thelinearintherangeofemodinwas3.12-9.36mg/L.Theaveragerecoverywas102.1%,anditsRSDratewas1.7% (n=9);RegressequationwasY=2.35×104X+8.80×103(R=0.999 8).Thelinearintherangeofphyscionwas2.1-10.5mg/L.Theaveragerecoverywas104.7%,anditsRSDratewas1.3%(n=9).ConclusionRP-HPLCisareliableandaccuratemethod,whichcanbeappliedfordeterminationofemodinandphyscioninJuemingJiangzhiTablets.

chromatography,highperformanceliquid；JuemingJiangzhiTablets；emodin；physcion

2013-12-23；

2014-01-14

律涛(1985-)，男，河北石家庄人，河北医科大学药学院实验师，从事药物化学和药物分析研究。

*通讯作者。E-mail：fanshuyan_ykd@163.com

R446.1；R975.3

A

1007-3205(2014)08-0908-03