朱栋麟 沈荣明 刘晓强 崔建勇 杨勇 朱一蒙

·论著·

CK7、CK18、CK5/6及P63在不同类型肺癌组织中的表达分析

朱栋麟 沈荣明 刘晓强 崔建勇 杨勇 朱一蒙

目的 探讨CK7、CK18、CK5/6及P63在各类型肺癌组织中的表达情况。 方法 对104例肺癌手术标本进行免疫组化分析, 联合检测CK7、CK18、CK5/6及P63的表达, 同时分析它们在不同类型肺癌中的表达情况。 结果 CK7在腺癌、腺鳞癌及大细胞癌中的阳性表达率分别为91.07%、85.71%及50.00%, 在鳞癌和小细胞癌中无阳性表达。CK18在腺癌、腺鳞癌、小细胞癌及大细胞癌中的阳性表达率分别为96.43%、85.71%、100%及100%, 在鳞癌中无阳性表达。CK5/6在鳞癌中的阳性表达率为100%, 在腺癌、腺鳞癌、小细胞癌及大细胞癌中无阳性表达。P63在鳞癌和腺鳞癌中的阳性表达率分别为100%及14.29%, 在腺癌、小细胞癌及大细胞癌中无阳性表达。 结论 CK7及CK18可用于肺腺癌诊断, CK5/6及P63可用于肺鳞癌诊断。同时, CK18还可用于肺小细胞癌及大细胞癌的诊断。

肺癌；免疫组化；CK7；CK18；CK5/6；P63

近年来肺癌的发病率逐年增长, 已成为我国首位恶性肿瘤死亡原因［1］。其组织学分类类型众多, 常见的有腺癌、鳞癌、腺鳞癌、小细胞癌、大细胞癌等。目前越来越多的研究显示某些新兴的靶向治疗方案及联合治疗方案与肺癌组织学类型密切相关, 因而准确的分型对肺癌患者的治疗及预后有重要价值。高分化及中分化的鳞癌及腺癌不难诊断, 然而对于分化较差的标本, 以及纤维支气管镜活检组织等挤压明显的标本, 仅依靠HE染色判别类型已远远不够。本文收集肺癌手术标本104例, 对其进行CK7、CK18、CK5/6及P63的联合检测, 旨在探讨它们在不同类型肺癌组织中的表达特点,旨在为诊断与治疗提供帮助。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 标本来源于2008年1月~2012年12月在苏州市立医院手术切除并经病理确诊的肺癌患者, 共104例,其中男性70例, 女性34例, 年龄从44~84岁, 平均年龄为63.2岁。其中腺癌56例, 鳞癌22例, 腺鳞癌14例, 小细胞癌8例, 大细胞癌4例。所有手术标本均经10%中性福尔马林溶液固定, 常规取材、包埋、切片和HE染色。所选患者术前均未行放疗、化疗等治疗。

1. 2 免疫组织化学染色 CK7、CK18、CK5/6及P63抗体及二抗均来源于广州深达公司, 组织切片经常规脱蜡、水化、高压抗原修复3 min, 3%H2O2封闭内源性过氧化物酶, 使用iVision 免疫组化染色试剂盒, 用PBS代替一抗作为阴性对照。

1. 3 结果判定 CK7、CK18、CK5/6阳性表达于细胞质和细胞膜, P63定位于细胞核。判读结果综合染色强度及染色范围, 染色强度判读标准为：不着色为阴性, 黄色至褐色为阳性。阳性细胞范围判读标准为：无阳性细胞为阴性, 阳性细胞≤30%为灶性阳性, ＞30%为阳性。

2 结果

2. 1 CK7在肺癌组织中的表达情况 在104例肺癌组织中检测CK7的表达, 结果如表1所示, CK7在肺腺癌组织中的表达阳性率为91.07% (51/56), 局灶阳性率为5.36% (3/56)；在肺鳞癌组织中的表达阳性率为0, 局灶阳性率为27.27% (6/22)；在肺腺鳞癌组织中的表达阳性率为85.71% (12/14), 局灶阳性率为14.29% (2/14) ；在肺大细胞癌组织中的表达阳性率为50% (2/4), 局灶阳性率为50% (2/4)；而在肺小细胞癌中未检测到阳性表达。

2. 2 CK18在肺癌组织中的表达情况 CK18在各类型肺癌中的表达结果如表2所示, 其在肺腺癌组织中的表达阳性率为96.43% (54/56), 局灶阳性率为3.57% (2/56)；在肺鳞癌组织中的表达阳性率为0, 局灶阳性率为81.82% (18/22)；在肺腺鳞癌组织中的表达阳性率为85.71% (12/14), 局灶阳性率为14.29% (2/14) ；在肺小细胞癌及大细胞癌中表达阳性率均为100% (8/8, 4/4)。

2. 3 CK5/6在肺癌组织中的表达情况 CK5/6在各类型肺癌中的表达结果如表3所示, 其在肺腺癌组织中仅有局灶阳性表达8.93% (5/56)；而在肺鳞癌组织中的表达阳性率为100%；在肺腺鳞癌组织中为局灶阳性表达85.71% (12/14) ；在肺小细胞癌及大细胞癌中均无阳性表达。

2. 4 P63在肺癌组织中的表达情况 P63在各类型肺癌中的表达结果如表4所示, 其在肺腺癌组织中仅有局灶阳性表达21.43% (12/56)；而在肺鳞癌组织中的表达阳性率为100%；在肺腺鳞癌组织中阳性表达率为14.29% (2/14), 局灶阳性率为57.14% (8/14) ；在肺小细胞癌中有灶性表达25% (2/8), 在大细胞癌中无阳性表达。

表1 CK7在各类型肺癌中的表达情况

表2 CK18在各类型肺癌中的表达情况

表3 CK5/6在各类型肺癌中的表达情况

表4 P63在各类型肺癌中的表达情况

3 讨论

肺癌的个体化治疗将成为临床肺癌治疗的主流趋势, 毫无疑问, 对肺癌的准确分型是这一方案得以施行的前提。以往人们重点关注肺小细胞癌与非小细胞癌的区分, 然而大量研究发现非小细胞中的组织学分类也至关重要。如临床试验发现针对EGFR的靶向药物吉非替尼及埃罗替尼等仅对肺腺癌患者疗效明显。故而探讨分子标志物在不同类型肺癌中的表达, 充分发挥其指导诊断及治疗的作用, 值得深入研究。

细胞角蛋白(cytokeratin, CK)主要分布于上皮细胞, 是细胞的主要骨架蛋白。它们具有极高的保守性和组织分化特异性, 与上皮细胞的类型、增殖、分化密切相关, 因而被用作肿瘤标志物［2,3］。P63在正常肺组织中表达于支气管储备细胞,而不表达于上皮细胞, Wang BY等［4］研究了30例肺鳞癌组织, 发现其均表达P63, 少数肺腺癌和细支气管肺泡癌也有表达。也有研究认为P63仅表达于鳞癌, 在其他类型肺癌中基本不表达。

越来越多的研究表明多个抗体的联合检测在肺癌组织学分类中的实用价值大于单个指标的运用［5］。有研究在12株肺癌细胞株中检测了CK5/6、CK14、CK17及CK18等分子标志物的mRNA水平, 并在95例非小细胞肺癌患者组织标本中检测了其蛋白表达, 发现CK5/6、CK14、CK17在鳞癌中表达较高, 且其高表达与低分化相关, CK7、CK18则高表达于腺癌细胞［6］。张同海等人联合检测了TTF1、CK5/6、P63和napsinA在肺鳞癌及腺癌中的表达, 认为P63和CK5/6共同阳性表达与TTF1和napsinA共同阴性表达更支持肺鳞癌, 而非肺腺癌, 反之亦然［7］。杨艳等研究表明, 在肺腺癌中, CK7的灵敏度和特异度分别为98.6%和61.5%, CK18则分别为 98.6%和37.5%［8］。

本研究结果表明, 在所观察的56例肺腺癌中, CK7与CK18表达阳性的病例分别为51例及54例, 灵敏度为91.07%及96.43%, 而CK7或CK18表达阳性者共56例, 灵敏度为100%。而两者在22例肺鳞癌中均为阴性表达, 表明CK7与CK18联合运用对肺腺癌诊断意义明确, 与文献报道相符。同时14例腺鳞癌中的腺癌成份均可检测到CK7及CK18的表达。而CK7在大细胞癌中部分表达, 在小细胞癌中不表达。但CK18在小细胞癌及大细胞癌中均为阳性表达,提示小细胞癌及大细胞癌与低分化腺癌的鉴别仍需要其它分子标志物的加入。

在对CK5/6及P63的检测中发现, 二者在22例肺鳞癌组织中均为阳性表达, 阳性率100%, 在56例肺腺癌中均为阴性表达, 提示CK5/6与P63联用可准确鉴别肺鳞癌与腺癌,与文献报道相符［9-11］。P63在腺鳞癌中部分表达阳性, CK5/6在85.71%的腺鳞癌中局灶表达阳性。在8例小细胞癌和4例大细胞癌中CK5/6表达均为阴性；P63在大细胞癌中无阳性表达, 在小细胞癌中有25%呈局灶阳性表达。结合CK7的检测结果, 可发现在小细胞癌及大细胞癌中, 上皮标志物表达水平较低, 与其分化较差相符合。

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Analysis of the expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 in various types of lung cancer tissues

ZHU Dong-lin, SHEN Rong-ming, LIU Xiao-qiang, et al.
Department of Thoracic Surgery, Suzhou Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Suzhou 215000, China

Objective To evaluate the expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 in various types of lung cancer. Methods The expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 proteins in 104 specimens of lung cancer were detected by immunohistochemistry. And the expression of CK7, CK18, CK5/6 and P63 in different types of lung cancer tissues were also analyzed. Results The positive expression of CK7 in adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma and large cell carcinoma were 91.07%, 85.71% and 50.00% respectively. And there was no positive expression in squamous cell carcinoma and small cell carcinoma. The positive expression of CK18 in adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma, small cell carcinoma and large cell carcinoma were 96.43%, 85.71%, 100 % and 100% respectively. And there was no positive expression in squamous cell carcinoma. The positive expression of CK5/6 in squamous cell carcinoma was 100%. And there was no positive expression in adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma, small cell carcinoma and large cell carcinoma. The positive expression of P63 in squamous cell carcinoma and adenosquamous carcinoma were 100% and 14.29%. There was no positive expression in adenocarcinoma, small cell carcinoma and large cell carcinoma. Conclusion CK7and CK18 can be used in diagnosis of lung adenocarcinoma. CK5/6 and P63 can be used in diagnosis of lung squamous cell carcinoma. Meanwhile, CK18 can be used in the diagnosis of lung small cell carcinoma and large cell carcinoma.

Lung cancer; Immunohistochemistry; CK7; CK18; CK5/6; P63

215000 南京医科大学附属苏州医院/苏州市立医院东区胸外科