蔡 威，周 逸，杨 锴，陈曼华，杨飞燕

华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院心内科 武汉 430014

沉默Fas和PKCδ表达对游离脂肪酸诱导的HUVEC凋亡的影响

蔡 威，周 逸，杨 锴，陈曼华，杨飞燕#

华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院心内科 武汉 430014

#通讯作者，女，1976年4月生，博士，副主任医师，研究方向：冠心病发病机制，E-mail:feiyanyang@hotmail.com

PKCδ；Fas；游离脂肪酸；人脐静脉内皮细胞；凋亡；siRNA

目的：探讨Fas与PKCδ在游离脂肪酸(FFA)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中的作用。方法①取对数生长期HUVEC，分为空白组，对照组，50、75、100 μmol/L FFA组及相应FFA+PKCδ siRNA转染组，采用比色法检测细胞增殖情况，Western blot检测p-PKCδ蛋白的表达。②将HUVEC分为空白组，对照组，FFA组(100 μmol/L FFA处理)和FFA+PKCδ siRNA组，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。③取100 μmol/L FFA干预后的HUVEC分别转染无关序列siRNA和Fas siRNA, 以未转染细胞作空白对照，Western blot法检测p-PKCδ和Fas蛋白的表达。结果①各组细胞增殖水平差异有统计学意义(F=20.863，P<0.001)，FFA可抑制细胞增殖(P<0.05)，而PKCδ siRNA能减弱FFA对细胞增殖的抑制(P<0.05)。各组细胞p-PKCδ蛋白的表达差异有统计学意义(F=229.072，P<0.001)，FFA能提高p-PKCδ蛋白的表达水平(P<0.05),而PKCδ siRNA可抑制FFA引起p-PKCδ蛋白的表达(P<0.05)。②各组细胞凋亡率差异有统计学意义(F=86.973，P<0.001)，FFA可增加细胞凋亡(P<0.05)，而PKCδ siRNA能降低FFA所致的凋亡(P<0.05)。③各组细胞Fas蛋白表达差异有统计学意义(F=122.162，P<0.001)，Fas siRNA可减低HUVECFas蛋白的表达(P<0.05)。结论FFA诱导的HUVEC凋亡可能由PKCδ涉及的Fas通路介导。

游离脂肪酸(free fatty acid，FFA)在内皮细胞损伤所致的心脑血管疾病进展中扮演重要角色[1-3]。PKCδ已经被确定是多种细胞功能的关键介质，包括细胞增殖和凋亡[4-5]。PKCδ可诱导多种细胞凋亡，包括嗜中性粒细胞、角质形成细胞、神经元细胞、成纤维细胞、转化细胞和心肌细胞[6]。前期报道[7-8]发现，PKCδ与Fas介导的凋亡有协同作用。该研究应用FFA药物干预人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelium cell,HUVEC)，并应用RNA干扰技术在FFA干预条件下抑制PKCδ的表达，观察沉默PKCδ的表达对FFA干预的HUVEC增殖和凋亡的影响；同时，应用RNA干扰技术沉默Fas蛋白，检测Fas和PKCδ蛋白在FFA干预的HUVEC中的变化，旨在探讨PKCδ和Fas与凋亡有关的相互作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1细胞和试剂HUVEC购自武汉大学生物保存中心。……