★ 张若良 钟国庆 刘小玉

(赣州市食品药品检验所 江西 赣州 341000)

穿黄清热胶囊由穿心莲、一枝黄花两味药组成,具有清热解毒的功效，用于急性上呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽喉炎等热毒壅盛者。原标准只测定制剂中穿心莲药材的单一成分脱水穿心莲内酯，因穿心莲制剂在生产和贮存过程中，其有效成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯会相互转化，故原标准不利于产品的质量控制，本文采用HPLC法对制剂中穿心莲的有效成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯进行含量测定，所建立的方法准确、专属性强，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)；XS205DU型电子天平；穿心莲内酯对照品(批号110797-200307)、脱水穿心莲内酯对照品(批号110854-200306)均购自中国药品生物制品检定所；穿黄清热胶囊(江西保利制药有限公司，批号081201，081202，081203，规格均为0.35g)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Thermo syncronis C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相:甲醇-水(65∶35)；流量1.0mL/min；检测波长:穿心莲内酯225nm，脱水穿心莲内酯254nm；柱温：30℃；进样量10μL。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于5000，穿心莲内酯峰与脱水穿心莲内酯峰的分离度大于2.0。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取穿心莲内酯对照品10.01mg与脱水穿心莲内酯对照品10.28mg，同置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液制备 取供试品20粒，精密称定，取内容物混匀，精密称取约1g，置具塞锥形瓶中，精密加入40%甲醇25mL，称定重量，浸泡1 h，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用40%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL，至中性氧化铝柱(200～300目，5g，内径1.5cm)上，用甲醇15mL洗脱，收集洗脱液，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性溶液制备 取不含穿心莲的阴性制剂按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 干扰试验 取供试品溶液，对照品溶液和阴性溶液各10μL，注入液相色谱仪，供试品溶液主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致，且阴性无干扰，见图1。

A.对照品(225nm)；B.供试品(225nm)；C.阴性样品(225nm)；D.对照品(254nm)；E.供试品(254nm)；F.阴性样品(254nm)

图1 HPLC色谱图

(1.穿心莲内酯；2.脱水穿心莲内酯)

2.4 线性关系考察 精密称取穿心莲内酯对照品12.53mg与脱水穿心莲内酯对照品12.58mg，同置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取0.4，1，2，5，10mL分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样10μL测定。分别以穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯进样中的量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程，结果穿心莲内酯回归方程为Y=2.0933×106X+4.4575×103，r=0.9999，脱水穿心莲内酯回归方程为Y=1.5797×106X+1.1981×104，r=0.9999，结果表明，穿心莲内酯在0.10024～2.5060μg及脱水穿心莲内酯在0.10064～2.5160μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取对照品溶液重复进样5次,测得峰面积，穿心莲内酯的RSD为0.30%，脱水穿心莲内酯的RSD为0.37%。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号：081201)于配制后0，2，4，6，8，10 h分别进样10μL，测得峰面积的RSD，穿心莲内酯为0.26%，脱水穿心莲内酯为0.67%，表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.7 重复性试验 取供试品6份(批号：081201)，照供试品溶液制备方法制成供试品溶液，分别测定含量，穿心莲内酯平均含量为3.50mg/g，RSD为0.39%；脱水穿心莲内酯平均含量为7.06mg/g，RSD为0.45%。

2.8 回收率试验 取已知含量的供试品(批号081201)约0.4，0.5，0.6g(各3份)，精密称定，取样0.4g的分别精密加入对照品的40%甲醇溶液(穿心莲内酯0.5012mg/mL，脱水穿心莲内酯0.5032mg/mL)5mL，甲醇20mL，取样0.5g的分别精密加入对照品溶液上述对照品溶液6.25mL，甲醇18.75mL，取样0.6g的分别精密加入上述对照品溶液7.5mL，甲醇17.5mL，分别混匀后按供试品溶液制备方法处理，测定含量，计算回收率，结果见表1～2。

表1 穿心莲内酯回收率测定结果

表2 脱水穿心莲内酯回收率测定结果

2.9 样品测定 取3批样品，依法制备供试品溶液，分别取对照品溶液、供试品溶液各10μL进样，测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果 /mg·粒-1

3 讨论

3.1 检测波长的选择 提取对照品溶液穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯保留时间处在200～400nm的波长范围内的光谱图，结果穿心莲内酯在225nm，脱水穿心莲内酯在254nm，有最大吸收，参照文献，选用穿心莲内酯225nm，脱水穿心莲内酯254nm作为检测波长。

3.2 浸泡时间的选择 取同一批样品约1g(4份)，试验分别浸泡0，30，60，120min后同供试品测定方法测定含量，结果分别为3.51，3.68，3.76，3.77mg/粒，表明供试品浸泡60min即可提取完全。

3.3 超声时间的选择 取同一批样品约1g(6份)，试验浸泡60min后分别超声0，10，20，30，40，50min后同供试品测定方法测定含量，结果分别为3.49，3.62，3.70，3.76，3.76，3.77mg/粒，表明供试品超声30min即可提取完全。

3.4 洗脱体积的选择 取同一批样品约1g(3份)，试验甲醇洗脱体积分别为10,15,20mL，其它同供试品测定方法分别测定含量，结果分别为3.67，3.76，3.76mg/粒，表明15mL即可洗脱完全。

[1]国家食品药品监督管理局标准.YBZ07862008[S].

[2]国家药典委员会.中国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

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