徐雅琴，曹淑梅，于 倩*，姜日花

(1.吉林大学中日联谊医院，吉林 长春130033;2.解放军总装备部干休所，河北 保定071000)

带状疱疹(herpes zoster,HZ)是由水痘-带状疱疹病毒(varicella zostervirus,VZV)引起的病毒性皮肤病，既往研究证实淋巴瘤、肺癌、前列腺癌等恶性肿瘤患者更易罹患带状疱疹[1]。为此我们利用流式细胞仪检测了51例带状疱疹患者外周血淋巴细胞亚群，结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2012年7月至2013年5月就诊于我院的带状疱疹患者，诊断依据为临床症状、体征及辅助检查，所有患者近6个月内未用过皮质类固醇激素、免疫抑制剂等。患者51例，男23例，女28例，年龄22～75岁，平均年龄52.3。对照组为健康志愿者，两组人群在性别、年龄上均具有可比性。

1.2 主要仪器及试剂

1.2.1 试剂与仪器 淋巴细胞亚群检测试剂盒购自美国贝克曼库尔特(Beckman Coulter)公司，仪器为美国BD公司生产的Cytomics FC500。离心机：类型：LD4-2A(Ⅰ)，北京京立公司产品。

1.2.2 研究方法 患者组及对照组均采集2ml EDTA-K2抗凝外周血进行淋巴细胞亚群测定。每个患者抽取抗凝血300 μl平均置于3个试管中。试管1中加入20 μl四色标记的CD45/CD4/CD8/CD3抗体，试管2加入CD45/CD56/CD19/CD3抗体，试管3加入等量同型对照抗体(美国贝克曼库尔特Beckman Coulter公司)。于每个试管内加入500 μl溶血素，充分混匀后置于室温下避光保存15 min；将3 ml PBS加入各个试管内，充分混匀后放入离心机离心(转速：1 500 rpm)5 min后去除上清；最后将500 μl PBS加入去除上清后的各试管中，充分混匀。所制备液体上机进行流式细胞仪检测。

2 结果

2.1 外周血T淋巴细胞亚群的比较

患者组与对照组比较,外周血CD3+细胞、CD3+CD4+细胞百分比降低，差异有统计学意义(P<0.05)。CD3+CD8+细胞百分比及CD3+CD4+/CD3+CD8+虽较正常组降低，但无统计学差异 (P>0.05)。详见表1。

2.2 外周血B淋巴细胞及NK细胞比较

患者组与对照组比较，外周血CD3-CD19+B淋巴细胞的百分比升高，CD16+56+NK细胞的百分比降低，但差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

表1 外周血T淋巴细胞亚群检测结果

表2 外周血B淋巴细胞及NK细胞检测结果

3 讨论

在机体的调节性免疫反应中发挥主要作用的T淋巴细胞及B淋巴细胞分别主要介导细胞免疫和体液免疫。目前的研究从多方面证实了机体在对抗VZV感染过程中是以细胞免疫反应为主。既往报道感染过带状疱疹病毒的成人与正患有水痘的儿童密切接触后，其外周血VZV特异性CD3+CD4+T细胞及其分泌的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和 白细胞介素-2(IL-2)与未暴露组和暴露前相比明显升高[2]。健康人中针对水痘-带状病毒细胞浆和细胞膜的糖蛋白GB、GE、和位于细胞核的IE62上述VZV蛋白质反应是CD3+CD4+T细胞介导，而CD3+CD8+T细胞对这三个VZV蛋白质的反应则维持在较低水平[3],皮损的组织病理显示浸润细胞中CD3+CD4+T细胞/CD3+CD8+T细胞比值范围从1.0到2.0不等[4]。

固有免疫系统是细胞免疫反应对抗致病性感染的第一道防线，NK细胞是固有免疫细胞中防御传染病尤其是病毒感染的关键，它能直接裂解受病毒感染的靶细胞[5]，其还能依赖其分泌的细胞因子干扰素IFN-γ介导CD3+CD8+T细胞的增殖[6]。虽然目前尚不清楚NK细胞消除病毒感染细胞的确切机制，但已有病例报告显示在选择性NK细胞缺失的患者中出现了致死性的疱疹病毒感染[7]。

本实验患者组外周血CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞百分比均较正常组降低，有统计学差异(P<0.05)，这与以上研究结论基本一致，提示CD3+CD4+T细胞在对抗水痘-带状疱疹病毒的过程中发挥着主要作用，机体CD3+CD4+T细胞的减少是体内病毒被激活的关键。此外，本研究CD3+CD8+T细胞百分比、CD16+56+(NK)细胞百分比、CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞比值较正常组降低，CD3-CD19+细胞即B细胞百分比与正常组比稍高，但均无统计学差异(P>0.05)，可能由于样本量较少，存在偏倚，有待今后继续研究。

本研究结果表明：带状疱疹患者存在细胞免疫功能低下，调节患者的细胞免疫状态，可能有助于本病的治疗，对恶性肿瘤的预防也会起到积极作用。

参考文献：

[1]Iglar K,Kopp A,Glazier RH.Herpes zoster as a marker of underlying malig-nancy[J].Open medicine,2013,7(2):e68.

[2]Vossen MT,Gent MR,Weel JF,et al.De-velopment of virus-specific CD4+T cel-ls on reexposure to Varicella-Zoster virus[J].The Journal of Infectious Diseases,2004,190(1):72.

[3]Kleemann P,Distler E,Wagner EM,et al.Varicella-zoster virus glycoproteins B and E are major targets of CD4+and CD8+T cells reconstituting during zosterafter allogeneic transplantation[J].Haematologica,2012,97(6):874.

[4]Morizane S,Suzuki D,Tsuji K,et al.The role of CD4 and CD8 cytotoxic T lymphocytes in the formationof viral vesicles[J].The British Journal of Dermatology,2005,153(5):981.

[5]Ihara T,Kato T,Torigoe S,et al.A-ntibody response determined with antibod-y-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC),neutralizing antibody,and vari-cella skin test in children with natural varicella and after varicella immunizati-on[J].Acta paediatrica Japonica,1991,33(1):43.

[6]Whitmire JK,Eam B,Benning N,et al.Direct interferon-gamma signali-ng dramatically enhances CD4+and CD8+T cell memory[J].Journal of Immunology,2007,179(2):1190.

[7]Etzioni A,Eidenschenk C,Katz R,et al.Fatal var-icella associated with selective natural k-iller cell deficiency[J].The Journal of Pediatrics,2005,146(3):423.