李乐文，王洪峰，于 磊，陈新华

(1.双辽市中医院，吉林 双辽136400；2.长春中医药大学，吉林 长春130117)

实验性自身免疫性神经炎(EAN)是急性格林-巴利综合征(GBS)的经典动物模型，两者在发病机制、临床表现、神经电生理等方面极为相似。GBS属于中医学“痿证”范畴，中药和针灸疗法对GBS的具有良好的临床疗效[1-3]。本实验通过观察电针五脏俞配合益髓通经方对EAN家兔神经电生理功能的影响。

1 材料和方法

1.1 实验动物

健康大耳白兔64只，雌雄不限，体重在2.0-2.5 kg之间，皮毛光滑润泽，呼吸道通畅，足部皮肤红润，由长春生物制品研究所提供[许可证号SCXK-(吉)2003-0002]。自由给水和家兔饲料，实验室温度保持在17-24℃之间。

1.2 主要实验试剂和仪器

益髓通经方(主要药物为马钱子和龟板胶，由长春中医药大学制剂实验室提供)；完全弗氏佐剂(北京鼎国生物技术有限责任公司)；兔免疫球蛋白标准品(北京鼎国生物技术有限责任公司)；牛坐骨神经髓鞘碱性蛋白(MBP，由吉林大学酶工程实验室提取)；五通道肌电图诱发电位仪(英国Medelec Synergy)。

1.3 EAN动物模型建立方法

参照郭向东[4]方法建立国际公认的髓鞘碱性蛋白II(P2)免疫动物模型。取3 ml提取的牛坐骨神经髓鞘碱性蛋白(MBP)加上3 ml完全弗氏佐剂，经试管振荡器摇匀，将两者充分混合后多点注入兔背部皮下。第21 d加强免疫，以出现下述症状表现为造模成功：精神萎靡，活动减少，食欲减退，体重下降，尾部及足爪皮毛不洁，四肢无力，软瘫，以后肢为重，反射和应激机能减低。加强免疫后第2天开始实验治疗。

1.4 动物分组与给药

64只家兔随机分为空白组、模型组、免疫球蛋白组和针药结合组，每组16只。除空白组外，其余三组均按造模方法制备EAN动物模型。空白组和模型组，不予任何治疗，仅作同期对照观察。免疫球蛋白组予以腹腔注射丙种球蛋白(IVIG)治疗，每只家兔治疗剂量为400 mg/kg/d，连续治疗5 d。针药结合组采用电针膀胱经五脏俞治疗，其中心俞、肝俞、脾俞、肺俞四穴向内下方斜刺0.5-1 cm，肾俞向下斜刺0.5-1 cm，然后接电针疏密波，电压2v，频率2-30 Hz，15 min/次，1次/d，连续治疗14 d；同时配合益髓通经方灌胃治疗，10 ml/次，2次/d。各组分别于第7 d、14 d各半数动物评价1次。

1.5 评价指标及检测方法

1.5.1 运动神经传导速度测定 每只家兔取双侧坐骨神经进行测定，沿家兔坐骨神经走行路线备皮，在其臀横纹处放置刺激电极，远端肌腹与肌腱处放置记录电极，给予电刺激，记录时间。再向下移动刺激电极的位置，给予电刺激，记录时间。用皮软尺测量出两次刺激电极的距离及潜伏期时间差，计算出家兔坐骨神经运动传导速度。刺激电脉冲频率为20 Hz，强度为10-20 V，波宽0.2 ms，扫描速度定为2 ms/cm。

1.5.2 坐骨神经F波检测 将刺激电极置于坐骨神经近端某一端点，阴极置于远端，以表面电极在相应支配肌肉处记录。用刺激电极对坐骨神经施以超强刺激，引起一个大的顺行传导的复合肌肉动作电位为M波，在肌肉动作电位(M波)后又出现一个小的肌肉反应电位称为F波，不随刺激强度的增加而减小。本实验通过检测F波的出现频率作为确认F波异常的指标，实验中对各组家兔双侧坐骨神经分别施以20次超强刺激，检测其F波出现频率，以F波出现频率低于刺激数的80%作为F波异常的判定标准[5]。

1.6 统计学处理

运动神经传导速度及F波异常率检测数据采用双样本t检验，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 一般情况

实验动物在免疫后第14天左右开始出现不同程度的EAN临床症状，发病率达78%。其表现为精神萎靡，活动减少，食欲减退，体重下降，尾部及足爪部皮毛不洁，四肢无力，反射和应激机能减低，先出现双后肢瘫，继而发展到四肢瘫，约在免疫后第21天达到高峰。各组实验动物在实验治疗后，至第1次评价(第7天)时，模型组死亡2只；至第2次评价(第14天)时模型组死亡4只。

2.2 坐骨神经运动传导速度的测定结果

实验结果显示，在第7天时，模型组、免疫球蛋白组、针药结合组与空白组比较，坐骨神经运动传导速度明显降低，具有极显著性差异(P<0.01)；但免疫球蛋白组、针药结合组与模型组比较，坐骨神经运动传导速度显著加快，具有极显著性差异(P<0.01)。在第14天时，免疫球蛋白组、针药结合组与模型组比较，具有极显著性差异(P<0.01)；与第7天时比较，两组家兔坐骨神经运动传导速度均明显加快，具有统计学意义(P<0.05)，但两组间比较无统计学意义(P>0.05)，详见表1。

表1 各组家兔坐骨神经运动传导速度测定结果(m/s)

注：◇表示与空白组比较P<0.01；△表示与模型组比较P<0.01；□表示与第7 d比较P<0.05；▽表示与免疫球蛋白组比较P>0.05。

2.3 坐骨神经F波异常出现率的测定结果

实验结果显示，在第7天时，免疫球蛋白组、针药结合组与模型组比较，坐骨神经F波异常出现率明显降低，具有极显著性差异(P<0.01)。在第14天时，免疫球蛋白组、针药结合组与模型组比较，同样具有极显著性差异(P<0.01)；与第7天时比较，两组家兔坐骨神经F波异常出现率明显改善，具有统计学意义(P<0.05)，但两组间比较无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

表2 各组家兔坐骨神经F波异常出现率测定结果(m/s)

注：△表示与模型组比较P<0.01；□表示与第7 d比较P<0.05；▽表示与免疫球蛋白组比较P>0.05

3 讨论

GBS作为一种免疫介导的炎性脱髓鞘性多发性神经根疾病，神经电生理检查在GBS诊断中有重要价值，GBS的神经肌电图主要表现为神经传导阻滞，神经传导速度明显减慢，不同程度的失神经改变等异常。江文等[6]对100例GBS病人神经电生理资料进行分析，发现原发性脱髓鞘型51例，原发性轴索型25例，神经失电位型8例，不明确型12例，正常型4例，表明GBS主要发病形式是原发性脱髓鞘型。李淮玉等[7]对GBS神经电生理改变特点进行了分析，约96%患者的神经电生理改变符合脱髓鞘损害，4%患者神经电生理改变为轴索损害型。

中医学认为GBS的发病，因髓虚导致邪毒易袭，邪毒侵袭后又能导致气滞血瘀，致使五脏阴阳失衡、肾精亏虚，加重髓虚，成为一个恶性循环。因此，五脏失衡、髓虚不足的表现存在于该病的全过程。在治疗上，不仅要注意疏通经络、导邪外出，更要注意调和五脏，益髓养精。五脏俞是五脏之气输注于背部的腧穴，具有反应五脏功能状态、调节五脏气血精微、治疗五脏相关疾病的作用，电针膀胱经五脏俞可通调五脏气机，恢复五脏正常功能。益髓通经方由龟板和马钱子组成，两者配伍，补中有通，相得益彰。其中，龟板为血肉有情之品，善滋肾损，肾为先天之本，肾中精气是机体生命活动的根本，对机体各方面的生理活动起着重要的作用，既能发挥对脏腑组织的滋养、濡润作用，又能对组织器官起到推动、温煦作用，肾精得以充养，则气血流畅，经络畅通；马钱子疏通经络，促进气血运行，既可促进毒邪的排出，又可使五脏功能和调，则肾精充盈，脊髓得养，两药共同针对痿病的发病机制而发挥治疗作用。本研究表明，电针膀胱经五脏俞配合益髓通经方可以明显提高EAN家兔坐骨神经运动传导速度，降低F波异常出现率，充分证明该治疗方法能有效恢复EAN家兔的神经传导功能，对GBS等痿证具有良好的治疗作用，在临床中可采用该疗法以提高GBS等痿证的治疗水平。

参考文献：

[1]刘宝芳.针刺为主治疗格林-巴利综合征20例[J].上海针灸杂志,2007,26(1):30.

[2]陈学农,周清毅,赵开祝,等.电针治疗格林-巴利综合征88例[J].上海针灸杂志,2003,22(6)：30.

[3]刘世琼,骆文郁.针灸治疗格林-巴利综合征恢复期4例观察[J].中医函授通讯,1993,3：22.

[4]郭向东,许贤豪,林嘉友,等.P2蛋白及其合成肽与实验性变态反应性神经炎的研究[J].中国神经免疫学和神经病学杂志,2003,10(1):25.

[5]汤晓芙.神经系统临床电生理学(下)[M].北京:人民军医出版社,2002.

[6]江 文,徐 燕,吴保仁,等.吉兰-巴雷综合征病人100例电生理学分型分析[J].中华神经科杂志.2000,33(4):234.

[7]李淮玉.格林-巴利综合征的临床、电生理、病理对照研究[J].中风与神经疾病杂志,2002,19(4):230.