程雪玲

(山西省陵川县畜牧兽医局,048300)

免疫胶体金快速诊断技术的起源比较早，最早可以在用以检测血清和尿液的HCG(绒毛膜促性腺激素)的免疫渗滤试验这篇报道中看到，这篇报道的作者是Valkin，时间是上个世纪80年代。其试验方法和ELISA比较接近，经过计算持续的时间仅仅5分钟。1989年，用胶体金代替酶作为标记物用于渗滤试验由Chun等学者提出。此外，在检测抗人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的试剂盒方面也取得了不错的成绩，该试剂盒也得到了广泛的应用。免疫胶体金快速诊断技术目前的使用范围非常广，这和其快速简便的优势有着直接的关系，其主要的应用范围有：药物测定、妊娠试验、检测蛋白质、检测传染病原抗体。但是，在兽医诊断的应用由于起步比较晚，因此技术还不够成熟，应用还不够广泛。

1 免疫胶体金快速诊断技术的基本原理

基本原理是将已知的特异性抗原或抗体固定于硝酸纤维素膜上某一区带作为检测带，在样品区滴加样品后，借助毛细作用，样品泳动至玻璃纤维膜，金标复合物溶解，并与样品进行抗原抗体反应，形成复合物，继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区，带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获，呈现红色条带。如样品中没有待测抗原或抗体，则不发生结合，即不显色。在硝酸纤维素膜检测区附近一般再固定上针对金标结合物相应的抗原或抗体作为质控带，无论样品中有无待测物，质控线都应显示，如无，则检测失败。整个过程一般在15分钟内完成，操作简单、快速，且不需任何仪器。比较常用的免疫胶体金快速诊断技术主要有免疫渗滤试验、免疫层析试验和滴金免疫渗滤试验。

1.1免疫渗滤试验

免疫渗滤试验的固相载体是微孔滤膜，将已知特异性抗原或抗体固定到微孔滤膜上，制成抗原活抗体宝贝的微孔滤膜并贴置于吸水材料上，依次在滤膜上滴加待检样本、免疫胶体金及洗涤液等试剂，并与滤膜上的相应抗体或抗原发生反应，过量时机很快深入吸水材料中，抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合物，从而使阳性结果在抹上呈现红色，液体通过微孔滤膜时，渗滤液中的抗原或抗体与膜上的抗体或抗原相接触，起到亲和层析的浓缩，达到快速检测的目的，同时洗涤液的渗入在短时间内即可达到彻底洗涤的目的。此种检测方法简化了操作步骤，成为临床检验的主要方法之一。本方法除试验盒本身外，不需要任何仪器设备。

1.2金免疫层析试验

是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技术是将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常迅速。

2 免疫胶体金快速诊断技术的优势

免疫胶体金快速诊断技术的优势主要有以下几个方面：（1）操作简单，方便。在进行诊断时，除试剂盒外，不需要任何的仪器设备。且样品仅需要一些简单的处理即可。（2）结果易于判定。检验结果仅需肉眼即可判定阴、阳性，不需要借助仪器。（3）特异性好，此种检测方法应用单克隆抗体进行标记，特异性强。（4）快捷迅速。等待结果仅仅需要几分钟就可以了，但是使用其他方法需要等待的时间就比较长，比如：使用ELISA需要一个小时左右、PCR的时间更长。（5）灵敏度高。虽然免疫胶体金快速诊断技术非常迅速，但是其灵敏度丝毫没有受到影响。

3 免疫胶体金快速诊断技术在兽医诊断中的应用

免疫胶体金快速诊断技术具有上述诸多优点，因此获得了广泛的应用，尤其是在一些缺乏专业人才以及设备的兽医诊断单位之中。目前，市场上的快速诊断试剂主要是用来检测以下疾病：瘟热、犬细小病毒、鸡传染性法氏囊病、猪繁殖与呼吸综合症、禽流感以及猪口蹄疫等。该技术可以使用不同的试剂盒实现对病原或抗体的检测。

3.1免疫金快速诊断技术在抗体检测中的应用

该方法一般是在NC膜上包被相应的抗原,使用SPA或者胶体金标记相应抗原。假如样品呈现出阳性，就说明样品中的抗体和SPA或者胶体金标记的特异性抗原结合，也就会看到红色的点或者线；假如是阴性，就看不到红色的点或者线。

有关研究人员构建检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法，对以下疾病进行检测：新城疫、禽流感、猪伪狂犬病、猪兰耳病，发现没有交叉反应。此外，针对200份猪血清使用了间接血凝试验与ELISA法开展猪瘟抗体检测，发现符合率分别为98.9%和98.4%。

3.2应用免疫金快速诊断技术检测病原

目前大多采用双抗体夹心法。用两种抗该病原的抗体用来包被NC膜和标记胶体金。假如样品呈现的是阳性，那么样品中的病原会和金标抗体以及NC膜上的抗体结合，这样我们就可以在NC膜上发现红色的线或者点。假如时阴性，就看不到红色的点或者线。有关研究人员构建了检测犬细小病毒的胶体金免疫层析法。通过对120份犬粪便样品，发现结果和HA结果对比和分析之后，HA效价大于1：40，结果判定为阳性。使用试纸条进行检测结果也均为阳性，且和犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒并没有交叉反应。此外，在样本保存半年之后再用该试纸进行检验，重复性也高达100%。

结束语：

作为一种新的诊断技术，免疫胶体金快速诊断技术是基于免疫胶体金标记技术建立起来的，最早产生于上个世纪80年代。免疫胶体金快速诊断技术主要被应用在抗原抗体反应之中，作为第四大免疫标记技术，其和放射免疫技术、免疫酶标技术以及免疫荧光技术相比，具有很大的优势。目前，该技术在人医的诊断方面应用比较广，例如：艾滋病、流行性出血热、旋毛虫、疟疾、乙型肝炎表面抗原等。其发展方向是实现定量或半定量检测，这样才能提高其敏感性与特异性，以及实现多元检测。

[1]孔繁德.免疫胶体金渗滤法检测猪温抗体的试验[J].中国动物检疫.2011（23）.

[2]金颜辉.应用金免疫层析技术检测猪瘟抗体的研究[J]..中国动物检疫.2013(4).