HPLC法测定草苁蓉中齐墩果酸的含量*

2014-08-08张海丰逄增玲朱冰洁

通化师范学院学报 2014年4期

张海丰，逄增玲，滕坤，朱冰洁

(通化师范学院制药与食品科学学院，吉林通化134002)

草苁蓉(Boschniakia rossica Fedtsch et Flerov.)为列当科植物紫花列当或黄花列当的全草及根.分布在吉林省长白山区，系长白山珍奇植物之一.地上部分含草苁蓉醛和草苁蓉内酯，又含C9、C10和C11萜内酯，根茎含甘露醇、生物碱.一般在7、8月间采集全草，除去杂质，洗净泥土，鲜用或晒干后备用均可，功效补肾壮阳，润肠，止血.主治肾虚阳痿，腰膝冷痛，老年习惯性便秘.目前国内对于草苁蓉中齐墩果酸含量的测定尚未见报道.本课题运用HPLC法对齐墩果酸进行了含量测定，为进一步开发利用该药用植物资源提供科学依据.

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)；KQ-200KDB型高功率数控超声波清洗器(巩义市予华仪器有限责任公司)；DHG-9101-1SA型电热鼓风干燥箱(上海三发科学仪器有限公司)；AL104 1/10万电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司).

野生中药草苁蓉，采于长白山周边地区，经鉴定为列当科植物草苁蓉的全草，将样品清洗，沥干表面水分，置恒温干燥箱中40℃干燥至恒重，粉碎，过40目筛，待用；齐墩果酸对照品(批号：110709-200304，含量测定用)中国药品生物制品检定研究院提供；水采用娃哈哈纯净水；甲醇为色谱纯；其余所用试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 Agilent XDB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相采用甲醇 -0.3%磷酸溶液(90：10)；柱温：室温；检测波长：210nm；流速：0.8ml·min-1.

2.2 供试品溶液制备

称取样品粉末0.5g，将其置于具塞锥形瓶中，随后加入30ml浓度95%的乙醇溶液，并超声提取2次，每次30min，抽滤，合并滤液至蒸发皿中，溶剂蒸干后用甲醇溶解定容至10ml容量瓶中，加95%甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取其续滤液作为样品溶液，备用.

2.3 对照品溶液制备

称取齐墩果酸对照品5mg，加50%甲醇定容于100ml容量瓶中，配制成每1ml含齐墩果酸0.05mg的溶液，摇匀，滤膜滤过，作为对照品溶液，备用.

2.4 样品测定

参照“2.1”项下的色谱条件，分别吸取齐墩果酸的对照品溶液和样品溶液各20μl进样.在对照品溶液与样品溶液色谱图相应位置上，有相同的保留时间(图1).按外标法计算峰面积，即得.结果见表1.

表1 草苁蓉中齐墩果酸的含量(n=3)

图1 草苁蓉HPLC色谱图

2.5 线性关系考察

精密吸取齐墩果酸的对照品溶液 2、4、6、8、10、20ml，分别置于10ml量瓶中，50%甲醇定容，摇匀，得到不同浓度的对照品混合溶液，再精密吸取上述对照品溶液各20μl，参照“2.1”项下的色谱条件测定峰面积，以峰面积Y为纵坐标，对照品浓度X(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线(图2)，齐墩果酸回归方程为：Y=0.3617X+11.129，r=0.9991(n=6).结果表明，齐墩果酸的进样量在0.2451～2.451μg范围内与峰面积响应值呈现良好的线性关系.

图2 齐墩果酸标准曲线

2.6 精密度试验

精密吸取上述的对照品溶液，参照“2.1”项下的色谱条件，重复进样5次，每次10μl，齐墩果酸的峰面积积分值相对标准偏差RSD为1.09%，说明本方法精密度良好.

2.7 稳定性试验

参照“2.1”项下的色谱条件，精密吸取“2.2”项下的样品溶液分别于 0、2、4、8、12、24h 测定，记录峰面积值.结果齐墩果酸的色谱峰面积无明显改变，RSD为1.28%，表明样品溶液的稳定性良好.

2.8 加样回收率试验

精密吸取齐墩果酸的对照品溶液5ml，置于150ml具塞三角锥瓶中，共设6份，于水浴上挥去溶剂后，加入6份已知含量草苁蓉各0.5g(齐墩果酸含量为0.4698mg/g)，按上述方法进行提取、测定，计算加样回收率.结果见表2.

3 讨论

3.1 提取方法选择

本文选用甲醇和不同浓度的乙醇作为提取溶剂，分别进行加热回流提取和超声提取，结果显示50%乙醇超声提取30min，方法操作简便、快速，提取率高.

3.2 色谱方法的建立

通过查阅参考文献以及进行预实验，分别比较了甲醇-0.3%磷酸水溶液(90：10)、甲醇-0.1%冰醋酸溶液(85：15)、甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液(23：42：35)、乙腈 -0.1%磷酸水溶液(85：15)等不同配比的流动相，通过反复摸索最终确定流动相为甲醇-水溶液(90：10)，用此流动相分离效果较好，并选用 Agilent XDB-C18色谱柱，检测波长210nm，将流速从 1ml·min-1降为 0.8ml·min-1使与相邻峰能达到基线分离，无重叠峰，R＞1.5，稳定，重现性好.