潘 华 王博文

(东北林业大学，哈尔滨，150040) (黑龙江省森林总队)

喜树不同器官次生代谢产物高效液相图谱的比较

潘 华 王博文

(东北林业大学，哈尔滨，150040) (黑龙江省森林总队)

对喜树种子、喜树幼苗根、茎和叶片次生代谢产物的高效液相图谱进行了分析比较，共检测出24种次生代谢产物：其中5种为种子、根、茎和叶片的共有成分，2种为根、茎和叶片的共有成分，3种为根和茎共有的，2种为种子和茎共有的；但这些成分在喜树各部位的相对值均不同。喜树幼苗茎的高效液相图谱与喜树种子的相似度最高，喜树种子和喜树幼苗叶片的相似度最小。

喜树；次生代谢产物；高效液相图谱

喜树(Camptothecaacuminata)是我国特有的多年生亚热带落叶阔叶树种，因其次生代谢产物喜树碱(CPT)具有良好的抗肿瘤活性而受到广泛关注[1]。目前针对喜树体内次生代谢产物的研究仅集中于喜树碱和10-羟基喜树碱[2-9]，对其不同器官次生代谢产物差异的研究较少[10]。笔者应用高效液相色谱技术，借鉴了指纹图谱思想，检测了喜树不同器官中的次生代谢产物，整体分析了各器官次生代谢产物的差异。

1 材料与方法

购自四川省金堂县的喜树种子经处理后，于2004年3月中旬播种获得实生苗，在温室中用花盆(盆底内径为10 cm)培育，2005年1月份采收根、茎和叶片。用于分析的种子和采集的幼苗根、茎和叶片于烘箱中80 ℃烘干后粉碎、备用。

美国Waters高效液相色谱仪(2996型二极管阵列检测器)、AB104型电子天平(瑞士)、DS-300A型超声清冼机(宁波市海曙达盛超声仪器厂)。色谱分析用甲醇为色谱纯(Burdick & Jackson公司)，水为超纯水；其它试剂均为分析纯。喜树碱标品自制，纯度为99.0%。

精密称取喜树碱标准品2.0 mg，以甲醇为溶剂超声溶解并定容至10 mL，摇匀备用。精密称取0.25 g样品于5 mL容量瓶中，加入甲醇，室温超声提取30 min，定容，过滤后进样。

色谱柱为英国Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm)，流速1 mL/min，进样量20 μL，检测波长210～400 nm；梯度洗脱程序：分4个阶段线性提高甲醇—2%乙酸体系中的甲醇比例，最初30 min，甲醇的质量分数由5%增至30%，至70、80、85 min时分别达到50%、80%、100%。

2 结果与分析

2.1 喜树不同器官次生代谢产物高效液相图谱的分析

按前述样品提取方法和色谱分析条件提取、测定，分别得到喜树种子、喜树幼苗根、茎和叶片的次生代谢产物高效液相色谱图(图1)。根据各色谱峰的相对保留时间和紫外光谱图，区分不同部位次生代谢产物的异同，并统一编号，以16号(喜树碱)作为参照，标记为s，色谱峰分析见表1。喜树种子、根、茎和叶片中共检出24种化合物，其中第2、11、16(s)、18、24号化合物是种子、根、茎和叶片的共有组分，但这些成分在各部位的相对值不同。除共有成分外，各部位亦含有其独特的成分，其中，第1、5、6、19、20号化合物为种子所特有，第12号化合物只在根中存在，第9和17号化合物为茎特有的，叶片中的特有成分是第13、14、22和23号化合物。此外，第3和21号化合物为根、茎和叶片的共有成分，根和茎中都含有第4、8和15号化合物，第7和10号化合物为种子和茎共有的。此方法提取得到的4个部位中次生代谢产物的数量基本相同，但种子和茎中次生代谢产物的相对值较高，而叶片中相对值则较低。

图1 喜树不同部位次生代谢产物的色谱图(λ=254 nm)

序号相对保留时间吸收波长/nm相对峰面积种子根茎叶片10．289257、38642151720．342237、32611865923452576714304753102522130．408245、36961651894753665195275340．43124245827348007950．590263、377115483760．645244、386243585370．700243、270、3664981568176665380．709244、289、328141750350858990．739256、35215934100．773249394079197978110．787250、3641221467189644768543163864120．803244、328408296130．844250、369173737140．90725281339150．965248、327259036129885416(s)1．000254、293、3684512964218958630468511676590171．085265、32734488181．130265、327、38014460623456541163861693191．141258、365340791201．179252、366，386830223211．185251、369576408319614334202221．229250、369186210267687231．283250、369128694241．335247106550615131041596904105877

2.2 喜树次生代谢产物高效液相图谱的相似度分析

指纹图谱表征的是样品整体特征，可以用来描述样品间的亲疏程度。相似度可以量化地描述各指纹图谱间的相似性，常用方法有相关系数法和夹角余弦法[11]。喜树种子、根、茎和叶片次生代谢产物高效液相图谱间的相似度分析结果显示(表2)，种子与茎的图谱相似度最高，叶片与根的次之，然后是根与茎的，而茎与叶片的高于种子与根的，种子和叶片的相似度最小。

表2 喜树不同部位色谱图间的相似度分析

3 结论

本研究测定得到了喜树种子、喜树幼苗根、茎和叶片的高效液相图谱。图谱中共检测出24种次生代谢产物，其中5种为种子、根、茎和叶片的共有成分，2种为根、茎和叶片的共有成分，3种为根和茎共有的，2种为种子和茎共有的。用本方法检测出的喜树种子、根、茎和叶片中的次生代谢产物的数量基本相同，相对值有所差异。喜树幼苗茎的高效液相图谱与喜树种子的相似度最高，喜树种子和喜树幼苗叶片的相似度最小。将中药指纹图谱分析方法应用于植物次生代谢产物的研究中，可解决单独考查一个或几个有效成分所得研究结果的局限性，二者的有机结合可获得更为全面的植物次生代谢产物的分布、变化信息。

[1] 阎秀峰，戴绍军，王洋，等．喜树碱代谢的研究进展[M]．北京：高等教育出版社，2001：221-232．

[2] 姚培潢．HPLC测定喜树碱的含量[J]．中国药学杂志，1994，29(3)：165-166．

[3] 张燕红，刘展眉，沈慧芳，等．反相高效液相色谱法测定喜树果中喜树碱的含量[J]．色谱，2003，21(2)：162-164．

[4] 阎秀峰，王洋，于涛，等．喜树叶中喜树碱含量的高效液相色谱分析[J]．分析测试学报，2002，21(2)：15-17,18．

[5] Ma Yanfang, Yu Tao, Dai Shaojun, et al. Determination of contents of 10-Hydroxycamptothecin in Camptotheca acuminata by high-performance liquid chromatogram[J]. Journal of Forestry Research,2002,13(2):144-146.

[6] 祖元刚，赵春建，付玉杰，等．改变检测波长高效液相色谱法测定喜树碱和羟基喜树碱的含量[J]．分析化学，2004，32(11)：1441-1444．

[7] Tang Zhonghua, Yu Jinghua, Zu Yuangang, et al. Camptothecin and 10-Hydroxycamptothecin accumulate differentially under specific developmental control in Camptotheca acuminata[J]. Acta Botanica Sinica,2003,45(4):494-499.

[8] 杨玉焕，王秋莉，张德辉，等．高效液相色谱法测定地肤中齐墩果酸质量分数[J]．东北林业大学学报，2013，41(4)：131-135．

[9] Zu Yuangang, Tang Zhonghua, Yu Jinghua, et al. Different responses of Camptothecin and 10-Hydroxycamptothecin to heat shock in Camptotheca acuminate seedling[J]. Acta Botanica Sinica,2003,45(7):809-814.

[10] 张玉红，王洋，阎秀峰．喜树种子萌发和幼苗发育过程中喜树碱含量的变化[J]．植物生理学通讯，2002，38(6)：575-577．

[11] 王玺，王文宇，张克荣，等．中药HPLC指纹图谱相似性研究的探讨[J]．沈阳药科大学学报，2003，20(5)：360-362,366．

High Performance Liquid Chromatograms of Secondary Metabolites in Different Organs ofCamptothecaacuminata

/Pan Hua(Northeast Forestry University, Harbin 150040, P. R. China); Wang Bowen(Heilongjiang Forest Corps)//

Journal of Northeast Forestry University.-2014,42(6).-126～128

The experiment was conducted to analyzed the high performance liquid chromatograms (HPLC) of the secondary metabolites in seeds, roots, stems and leaves ofCamptothecaacuminata. Twenty-four compounds were separated, five in the four organs, two in roots, stems and leaves, three in roots and stems, and two in seeds and stems. The contents are different in different organs. The similarity of chromatograms between seeds and stems is highest, and that between seeds and leaves is lowest.

Camptothecaacuminata; Secondary metabolites; High-performance Liquid Chromatograms (HPLC)

潘华，女，1979年2月生，东北林业大学学报编辑部，编辑。

，王博文，黑龙江省森林总队，干事。E-mail:bobowbw@163.com。

2013年4月2日。

Q946.8；S792.99

1) 中央高校科研业务费(2572014BC32)。

责任编辑：戴芳天。