郭德芳， 方梦萦， 张无敌， 刘丽春， 尹芳，赵兴玲， 柳静， 杨红， 刘士清， 陈玉保

(1.云南师范大学，云南 昆明 650500；2.云南省丽江市农村能源管理站，云南 丽江 674100)

0 引 言

根霉(Rhizopus)是常见的霉菌，在空气、土壤以及各种器具表面都有其孢子的存在.在酿造上，根霉扮演了重要角色，我国是最早使用根霉酿酒的国家[1].但是一些根霉菌种会产生毒素，使其在食品发酵中的安全性受到了质疑[2]，且对于菌类培养会产生一定影响，制约了菌类规模化生产.

对根霉生长影响及抑制作用的研究，主要有天然防腐剂和人工合成防腐剂(如甘草中的天然防腐剂[3]、侧柏叶挥发油制成的天然防腐剂[4]等)、中草药提取物(如广藿香提取物[5]、核桃叶提取物[6]等)、抑菌剂(如力克霜、多菌灵、甲基托布津[7]等)、化学试剂(如锌[8]、丙酮[9]等)以及温度[10].但是对于沼气发酵液对根霉的抑制未见报道.

沼液作为有机物在进行沼气发酵产生沼气的同时而得到的一种厌氧产物，含有多种农作物生长所需要的营养成分，同时又有杀灭或抑制植物病原菌的作用，是一种良好的有机液体肥料.相关的报道和实验已表明[11-15]沼液对农作物中的30余种病虫害具有一定的防治作用，与农药相比具有无抗性、价格低等优势，是理想的农药代替品.

沼液成分较为复杂，含有丰富的营养物质、矿物质、水解酶、B族维生素、氨基酸、植物激素、抗生素和腐殖酸等，对作物既有促进作用，又有抑制作用；同时，不同来源的沼液、不同处理的沼液对不同微生物的抑制效果也不完全相同.云南师范大学[16-18]采用不同的沼液对烟草赤星菌(Alternariaalternata)进行抑菌研究：利用不同浓度和不同温度的沼气发酵液以及经巴氏灭菌煮沸灭菌后的沼气发酵液对烟草赤星菌进行抑制作用，并对沼液与八种农药对烟草赤星病抑制的效果进行对比研究;此外还采用萃取后的沼液对烟草赤星菌、尖廉孢菌(Fusariumoxyspomm)进行抑制试验[19-21].本实验对不同来源的常见沼液对根霉进行相关抑制的对比研究，希望能对沼液综合利用提供一定指导.

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 供试病原菌

实验所用根霉为本实验室自行从土壤中提取并分离的黑根霉.

1.1.2 培养基

实验采用常规PDA培养基.

1.1.3 药品

比旋光度为+52.5°～53.0°的葡萄糖[19].

1.1.4 仪器

实验所用主要仪器如下：接种针、接种环、试管、培养皿、恒温培养箱、电磁炉、玻璃棒、纱布、SW-CJ-1F洁净工作台等[19].

1.2 方法

1.2.1 沼液处理方法

将不同来源的沼液经12 000rpm离心1 min即为实验组，对照组采用无菌蒸馏水[19].

1.2.2 数据处理方法

抑制菌丝生长率计算采用生长速率法[19].

抑制数(cm)=对照平板培养基上菌落直径-处理平板培养基上菌落直径[19]

相对抑制率%

1.2.3 实验方法

①将待试菌接种于PDA平板培养基上培养至长满整个平板，备用.

②抑菌实验：取布满供试黑根霉的PDA培养基平板，用无菌打孔器(Φ=8 mm)取出菌落边缘生长旺盛的菌丝，用接种针小心地将菌种块移入不同抑菌液处理的平板上，菌丝一面朝上，每个培养皿中放入三小块菌种，并呈三角形放于平板中央，加盖标记，于28 ℃恒温箱中培养，定时观察测量不同培养基平板上黑根霉菌落的直径[19].

③培养24 h后，用十字交叉法测量供试病原菌菌落生长直径并做好记录；以后每天测量一次菌落直径，待对照菌落长满培养皿后实验结束[19].

2 结果与分析

不同来源沼液对黑根霉进行抑菌的实验结果如图1.

图1 不同来源的沼液的抑菌情况

由图1数据计算抑菌率，得表1.对实验数据进行单因素方差分析，可得表2.

由表2可以看出，实验组与对照组之间存在很明显的差异(极显著差异)，由此可以得出：不同来源的沼液对黑根霉的抑制作用都很明显，其中蔬菜皮发酵液、水葫芦发酵液、蓝藻发酵液的抑制效果非常好，西番莲发酵液的抑制效果是好，猪粪发酵液的抑制效果是较好.同时可以初步判断出，以植物为发酵原料所获得的沼气发酵液要比以动物粪便为原料获得的沼气发酵液的抑菌效果好.

表1 不同来源沼液的抑菌率(%)

表2 不同来源沼液对黑根霉的抑制作用的单因素方差分析

3 结 论

由于沼气发酵液不仅对植物病原菌，如烟草赤星菌、尖廉胞菌、草莓枯萎病等有抑制作用，还对根霉、黑曲霉这些霉菌有一定的抑制作用，可知沼液对微生物的生长有一定影响，无论是抑制，还是促进，且不同来源的沼液、不同处理的沼液对微生物的抑制作用都是不同的.

研究结果表明，不同来源的沼液对黑根霉均有抑制作用，其中以蔬菜皮为原料的沼液的抑菌作用最强，而以猪粪为原料的抑菌效果最弱，同时蔬菜皮、蓝藻、西番莲为原料的沼液在抑菌过程中有一定波动，可能是沼液中的微生物在培养基上有一个适应性的过程.同时可大致推断出以植物为原料的发酵液抑菌效果要好于以动物粪便为原料的发酵液.本次实验可对沼液应用的扩展及绿色生态农村的建设和菌类经济发展、制酒提供一定的理论依据.

参 考 文 献:

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