张启声+李珺+王翠峰+蔡禄

摘要：电穿孔方法是一种高效导入外源DNA的技术。通过电转化法对酵母YPH 500进行外源DNA转化，研究了电转化中各因素对酵母转化率的影响。结果表明，电场强度、外源DNA浓度、感受态细胞状态对转化率有明显影响。采用均匀设计试验，利用逐步回归方法对试验结果进行分析， 结果表明，当电场强度在1 750 V，酵母OD 600 nm在1.3，外源DNA浓度为7.5 mg/L时，酵母转化率较高，约为24×102转化子数/μg DNA。

关键词：电转化；酿酒酵母；均匀设计

中图分类号：Q785；S963.32+7 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）03-0693-04

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是一种模式生物，常常作为表达系统。近些年，研究者常利用它进行外源基因的表达或其他基因操作技术，所以外源基因的导入是进行试验的先决条件。20世纪80年代，研究者开始利用电转化法将外源DNA导入酵母细胞，该方法现已成为常用方法[1，2]。在转化时，试验结果往往受感受态细胞状态、外源DNA浓度、电场强度等多个条件的影响，需要探索最佳电转化率的条件。但其中涉及多因素、多水平的试验，常规探索性试验工作量较大。均匀设计具有试验次数少，信息量大的优点，只需做少量试验，建立数学模型，就可得到最佳的配比。本试验将穿梭质粒通过电转化到酿酒酵母YPH 500中，从中考察电场强度、外源DNA浓度和酵母细胞不同的生长状态下3个因素对电转化的影响，以期为酿酒酵母电转化的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料与仪器

1.1.1 菌种和质粒 酿酒酵母YPH 500（遗传背景：MATα ura3-52 lys2-801anber ade2-101ochre trp1-Δ63 his3-Δ200 leu2-Δ1）、穿梭质粒pRS405由美国新泽西州医学院微生物学与分子遗传学部Carol S. Newlon教授赠送。……