黄海军+高其双+彭霞等

摘要：动物生物制品生产过程中细胞（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。细胞支原体污染可显著影响生产用细胞的培养及生物功能的发挥，最终影响生物制品的生产，给生物制品企业造成巨大损失，建立高效、快速、敏感度高的检测方法十分必要。建立了一种支原体巢式PCR检测方法，该方法高效、快速、灵敏，可以最大限度降低假阴性和假阳性结果的出现。该方法的建立对培养细胞、动物疫苗等生物制品企业的检测标准化管理有一定的借鉴意义。

关键词：支原体；细胞培养；巢式PCR；生物制品

中图分类号：S858.28；Q95 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）03-0690-03

细胞培养过程中支原体污染主要来源于所使用的动物源的一些培养材料，如血清、已被支原体污染的细胞株（系）或者是经操作人员传播。污染培养细胞的支原体一般有寄生于人、牛、猪或狗的少数几种类型。细胞培养液中支原体的浓度可达1×107个/mL，而不管是肉眼观察还是普通显微镜下观察，受支原体污染的细胞状态并无明显变化[1]。但是，越来越多的研究表明，支原体感染发生后能改变细胞的DNA、RNA及蛋白表达，使研究结果的真实性和可靠性大大下降[2，3]。由于竞争营养及支原体有毒的代谢产物，支原体污染可显著影响生产用细胞的培养及相应生物学功能的发挥，影响生物制品的质量。细胞被支原体污染长期困扰着疫苗（特别是生产弱毒苗）的生产企业，增加了企业生产、投资的风险，特别是在竞争日益激烈的当代社会，这种风险对疫苗生产企业来说通常是致命的。……