黄豪万，常明泉，李 玲，陈 芳

颠胃酸口服液中熊果酸的含量测定

黄豪万1，常明泉2*，李 玲1，陈 芳2

目的 建立颠胃酸口服液中熊果酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱：Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(88∶12)；检测波长210 nm，进样量20 μL，流速1.0 mL/min，柱温25 ℃。结果 熊果酸在2.1～63.0 μg/mL 范围内线性关系良好，y=1.793 5x+0.528 2(r=0.999 8),回收率为98.9%,RSD=1.48%(n=9)。结论 所建方法便捷、专属性强,适用于颠胃酸口服液中熊果酸的含量测定。

颠胃酸口服液；熊果酸；含量测定

0 引言

婴幼儿因感染、食物过敏、酶缺乏、免疫低下、营养不良或因胃寒、胃冷、食积等先天因素，易出现食后呕吐、胃肠痉挛、腹泻症状，这些症状在幼儿中频发、常见。颠胃酸口服液是一个针对上述症状和婴幼儿生理特点而开发的一个口服液[1]。该制剂以纯中药提取物为原料组方，主要成分为山楂提液、颠茄提取液、生姜提取液，辅以其他相应成分制备。山楂提取液是颠胃酸口服液中主要成分之一，具有健胃消食的功效，与6-姜辣素结合起到止泻的作用。颠茄提取液中的莨菪碱类物质用高效液相色谱法已能准确测定其含量[2-3]。生姜提取液中6-姜辣素按药典方法也可测得，之前该制剂中山楂提取液的含量测定还是空白。为了健全质量控制体系，确保临床用药安全、有效，本试验以熊果酸为指标，用高效液相色谱法对其含量进行测定，现报道如下。

1 仪器与试药

戴安3000型高效液相色谱仪(美国戴安公司);定量用熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110876-201054)；颠胃酸口服液(本院自制，批号：20130515、20130516、20130517)；甲醇为色谱纯，水为纯化水和超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[4-5]色谱柱：Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(88∶12)；检测波长210 nm，进样量20 μL，流速1.0 mL/min，柱温25 ℃。

2.2 溶液的制备 ①对照品溶液：精密称取熊果酸对照品10.5 mg于50 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，既得浓度为0.21 mg/mL的对照储备液，精密吸取该溶液1.0于10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得21.0 μg/mL溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；②供试品溶液：精密吸取颠胃酸口服液2.0 mL于100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；③阴性样品溶液：精密吸取不含山楂提取液的颠胃酸口服液2.0 mL于100 mL容量瓶中，按供试品溶液方法制备，即得。

2.3 系统适用性试验 分别取“2.2”项下的各溶液在“2.1”色谱条件下进样，记录色谱图，结果除阴性样品溶液外，对照品溶液、供试品溶液在同一时间均有相同色谱峰出现，理论塔板数为6 450，分离度为1.88，对照品溶液重复性试验RSD为0.94%(n=5)，拖尾因子为0.98，说明制剂中的其他成分对熊果酸含量测定无干扰。图1为系统适用性试验色谱图。

图1 高效液相色谱色谱图注：A对照品；B供试品；C阴性样品；1 熊果酸

2.4 标准曲线的建立 分别取“2.2” 项下浓度为0.21 mg/mL的对照品储备液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，即得每mL含熊果酸2.1、10.5、21.0、31.5、42.0、52.5、63.0 μg的溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液在“2.1”色谱条件下进样，重复操作3次，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程为y=1.793 5 x+0.528 2(r=0.999 8),熊果酸在2.1～63.0 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度性试验 取“2.2”项下的对照品溶液，在“2.1”色谱条件下分别进样5次，记录熊果酸的峰面积值，结果RSD为0.94%

2.6 稳定性试验 取“2.2”项下的供试品溶液，在“2.1”色谱条件下分别于0、3、6、12、24 h进样，测定熊果酸的峰面积值，结果RSD为1.49%，说明样品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批号(20130410)的颠胃酸口服液样品，按“2.2”项下供试品溶液方法制备,共5份，在“2.1”色谱条件下进样,测定熊果酸的平均含量，结果RSD为1.01%。

2.8 回收率试验 精密吸取不含山楂提取液的颠胃酸口服液样品2.0 mL于100 mL容量瓶中，共9份，每3份1组，按已测知样品含量的80%、100%、120%分别加入适量对照品溶液，按“2.2”项下供试品溶液方法制备，在“2.1”色谱条件下进样，测定样品峰面积值，按外标法计算熊果酸的含量，结果见表1。

2.9 含量测定 取颠胃酸口服液样品3批，各精密吸取2.0 mL于100 mL容量瓶中，按“2.2 ”项下供试品溶液方法制备，在“2.1”色谱条件下进样测定峰面积，按外标法计算熊果酸的含量，结果见表2。

表1 颠胃酸口服液熊果酸回收率实验结果(n=9)

表2 颠胃酸口服液中熊果酸含量测定结果(n=3)

3 讨论

山楂中主要含多种水溶性脂肪酸(如苹果酸、枸橼酸酸、琥珀酸)、脂溶性三萜酸(熊果酸)、芳香酸(如齐墩果酸、咖啡酸、绿原酸)，这些酸类物质具有助消化作用，而熊果酸是其中具有代表性的成份，其含量的高低决定颠胃酸口服液消化功能的强弱、临床疗效的好坏，它与6-姜辣素按一定比例复合，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌都具有良好的抑制作用[6]，《中国药典》[4]只规定了用氢氧化钠为滴定液滴定有机酸的方法，没有规定用高效液相色谱法测定、分离多种酸类成份的方法。本文参考相关文献，建立用高效液相色谱法测定熊果酸的含量。本研究为系统实验，在现有条件下将逐步摸索方法，对其他酸类成份的含量进行仪器测定。

熊果酸与齐墩果酸为一对异构体，两者含量测定均采用高效液相色谱法，在测定时显示两种成分分离效果均不理想，拖尾因子也比较大[5]，试验时分别比较了以甲醇-水(88∶12)、乙腈-0.02 mol/mL磷酸二氢钾(含0.2%辛烷磺酸钠)、磷酸二氢铵-磷酸缓冲液(pH 3.0)3种流动相对熊果酸的出峰效果[6]，曾在磷酸二氢铵-磷酸缓冲液(pH 3.0)和乙腈-0.02 mol/mL磷酸二氢钾(含0.2%辛烷磺酸钠)溶液中先后加入三乙胺、四丁基氢氧化铵，测定结果显示，三乙胺对改善拖尾因子和优化峰型无意义，四丁基氢氧化铵加入后，可使峰型收窄，拖尾因子变小，但回收率不理想，而提高甲醇用量，以甲醇-水(88∶12)做流动相时检测效果最佳。

颠胃酸口服液中还有颠茄提取液、生姜提取液，一些复杂成分的存在可能会对熊果酸的分离产生干扰，所以选择能充分溶解熊果酸的溶剂和流动相对有效提取该成分十分重要。在供试液制备时，曾参考文献考察了醇提、水提对熊果酸的检出率，结果以80%以上甲醇溶液提取效果最好，故使用流动相甲醇-水(88∶12)为提取溶剂，这可能因为熊果酸系脂溶性酸，而甲醇为脂溶性溶剂，在高浓度甲醇溶液中溶解效果好。不需要再另外配制流动相，降低检测成本。该方法用于颠胃酸口服液中熊果酸的含量测定，专属性强，结果重现性好。

[1] 常明泉，郝新才，叶立红，等.颠胃酸口服液的制备与质量控制[J].中国药师，2011，14(7)：1050-1051.

[2] 常明泉，黄良永，郝新才，等.HPLC法测定颠胃酸口服液中硫酸阿托品的含量[J].中国药师，2011,14(4)：566-567.

[3] 陈芳，常明泉，肖琴，等.高效液相色谱法测定颠胃酸口服液中东莨菪碱的含量[J].儿科药学杂志，2012,18(2)：39-41.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:中国医药科技出版社，2010:39-30，176-177.

[5] 周巧霞，顾振纶.山楂中熊果酸和齐墩果酸的高效液相色谱分析[J].中成药，2010,3(5):862-864.

[6] 王芳.山楂中熊果酸含量的RP-HPLC测定法[J].职业与健康，2011,27(20):2316-2318.

Content detection of ursolic acid in dianweisuan oral liquid

HUANG Hao-wan1,CHANG Ming-quan2*,LI-Ling1,CHEN-Fang2

(1.The People′s Hospital of MaoJian Distrct,Shiyan 442001,China;2.Shiyan Maternal and Child Health Hospital，Shiyan 442000,China)

Objective To establish the content detection method of ursolic acid in dianweisuan oral liquid.Methods HPLC method was used with Diamonsil-C18column (250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase was methyl alcohol and water (88∶12),the detection wavelength was at 210 nm,injection volume was 20 μL,column temperature was 25 ℃and flow rate was 1.0 mL/min.Results Ursolic acid curve was liner within a range of 2.1～63.0 μg/mL,liner equation was y=1.793 5 x+0.528 2(r=0.999 8),the average recovery was 98.9% withRSDof 1.48%(n=9).Conclusion The established method is simple and with good reproducibility,could be further used to investigate the determination of ursolic acid in dianweisuan oral liquid.

Dianweisuan oral liquid;Ursolic acid;Content detection

2013-08-25

1.湖北省十堰市茅箭区人民医院，湖北 十堰 442001；2.湖北医药学院附属太和医院；湖北 十堰 442000

*通信作者