王绪明， 黄 萱， 付政祺， 邹 丰， 张尚昆， 王兆一， 刘丽江△

(江汉大学 1医学院病理学与病理生理学教研室， 2江大病理诊断所组织病理诊断部，湖北 武汉 430056)

·论 著·

靶向ER-α36的vshRNA真核表达慢病毒载体的构建、鉴定及其对胃癌细胞增殖的影响*

王绪明1, 2， 黄 萱1, 2， 付政祺1, 2， 邹 丰1， 张尚昆1， 王兆一1， 刘丽江1, 2△

(江汉大学1医学院病理学与病理生理学教研室，2江大病理诊断所组织病理诊断部，湖北 武汉 430056)

目的： 针对雌激素受体(ER)-α36基因的特异性靶序列, 构建并鉴定靶向ER-α36基因RNAi慢病毒载体，研究ER-α36沉默后对胃癌细胞增殖的影响。方法: 筛选确定的ER-α36 基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的Oligo DNA，与慢病毒载体(GV307)连接，测序鉴定。转染293T细胞，包装产生慢病毒，感染胃癌SGC7901细胞株。荧光显微镜下观察SGC7901感染后荧光表达情况，real-time PCR和Western blotting方法检测ER-α36的表达变化。用1×10-10mol/L 的17β-雌二醇处理沉默ER-α36的SGC7901细胞，用细胞计数法观察细胞增殖能力的变化及检测相关下游信号通路分子Src、ERK1/2、cyclin D1表达的变化。结果: 阳性克隆PCR及测序证明成功构建慢病毒载体LV-ER-α36-RNAi，倒置显微镜下观察LV-ER-α36-RNAi慢病毒载体感染率达80%以上。 Real-time PCR和Western blotting方法证实四环素(TeT)诱导下LV-ER-α36-RNAi明显抑制SGC7901细胞内ER-α36 mRNA和蛋白质的表达。与对照组相比，沉默ER-α36的SGC7901细胞增殖能力减弱，Src、ERK1/2、cyclin D1蛋白表达明显降低，Src蛋白活化能力减弱(P<0.05)。结论: 我们构建的TeT诱导靶向ER-α36的vshRNA慢病毒载体LV-ER-α36-RNAi，可明显沉默ER-α36的表达，为研究ER-α36蛋白的作用机理提供实验依据，ER-α36与胃癌细胞等肿瘤细胞的增殖有关。

SGC7901细胞； 雌激素受体α36； 慢病毒载体

雌激素受体α36(estrogen receptor α36，ER-α36)是新近发现的ER-α (又称ER-α66)的亚型，由310个氨基酸组成，分子量35.7 kD，其基因编码序列位于人类染色体6q 24.2～25.3(GenBank ID: BX640939.1)，目前的研究发现其蛋白质主要定位于细胞膜。ER-α36与ER-α66不同的是拥有一段特有的氨基酸序列，即在末端有27个氨基酸与ER-α66不同。……