毛培新 贾 方 孙 雷 季 伟

（沧州出入境检验检疫局 河北沧州 061000）

柱前衍生-高效液相色谱法测定红枣中阿维菌素和甲维盐

毛培新 贾 方 孙 雷 季 伟

（沧州出入境检验检疫局 河北沧州 061000）

采用高效液相色谱荧光检测器检测建立了红枣中阿维菌素和甲维盐的多残留检测方法。样品用乙腈提取，以HLB固相萃取柱净化，经N-甲基咪唑和三氟乙酸酐的乙腈溶液在室温下进行衍生后，进行高效液相色谱荧光检测器检测分析。结果表明：阿维菌素和甲维盐分别在5-100ng/g范围内具有良好的线性关系，检测限为2.5ng/g，定量限为5.0ng/g，平均回收率达到82.4％-104.9％。

阿维菌素；甲维盐；高效液相色谱；红枣

1 前言

阿维菌素类（AVMs）抗寄生虫药，对很多害虫具有其他农药无法比拟的活性，目前对于多种果树，具有广谱、高效、安全等优点，其中阿维菌素（AVM）、甲维盐（EB)（全称甲氨基阿维菌素苯甲酸盐） 应用最为广泛；目前，在国内现行的标准中还没有同时检测植物源食品中AVM、EB的高效液相色谱的方法，液质联用的方法虽能够同时检测，但对设备要求较高，运行成本较大，本工作利用柱前衍生-高效液相色谱荧光检测法结合了农业部781号公告-5-2006的方法，并进行了条件优化，对沧州地区红枣中AVM、EB残留量进行检测，分离效果理想[1]。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 仪器

1100型高效液相色谱仪：安捷伦公司， 配有荧光检测器；IKA-T10均质器：德国IKA公司；EVOR50氮吹仪：美国EVA仪器有限公司；500mg/6mL WatersHLB固相萃取柱：waters公司。

2.1.2 试剂

乙腈为色谱纯：天津科密欧公司；无水硫酸钠为分析纯：天津光复试剂有限公司，经600℃灼烧4h，放置于密封容器中备用。

条件化试剂：乙腈、水、三乙胺体积比为30：70：1混合溶液；衍生化试剂1：三氟乙酸酐、乙腈体积比为1：2混合溶液；衍生化试剂2：N-甲基咪唑、乙腈体积比为1：1混合溶液；AVM、EB标准储备液：采用农业部环境保护科研监测所制备的100μg/mL标准溶液；AVM、EB标准使用溶液：将100μg/mL标准储备液，用乙腈配制成浓度为2μg/mL的标准使用溶液。

2.2 方法

2.2.1 色谱条件

安捷伦C18液相色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈-水（97：3）；柱温为40℃流速1.0mL/ min；激发波长（Ex）365 nm；发射波长（Em）470nm。

2.2.2 标准工作曲线制备、检出限的测定[2-4]

分别移取2μg/mL AVM、EB标准使用溶液25、50、100、200、400、500μL；置于10mL玻璃离心管中，分别加入300μL衍生化试剂1 和200μL衍生化试剂2，涡旋均匀后室温反应20min，以乙腈定容至1mL，按色谱条件对混合标准工作液系列进行测定。将红枣样品粉碎后，称取空白红枣样品5±0.05 g，做10个平行样，按标准工作液衍生的方法进行处理，计算空白样品的噪音与对应保留值处目标物的峰高的比值，按3S/ N为检测限，按10S/N为定量限。

2.2.3 样品预处理

准确称取已粉碎的红枣样品5±0.05 g，置于50 mL玻璃离心管中，加入乙腈15 mL，以10000r/ min转速均质1min（约10000r/min），后以3000r/ min转速离心5min，将上清液置于另一玻璃离心管中。向提取液中加入0.5mL三乙胺，加入纯水至总体积约为50mL，确保水与提取液比例不小于3：2，否则待测物不能被吸附剂充分保留[5]。

HLB固相萃取柱依次以5ml乙腈和5mL条件化试剂进行条件化，并在吸附剂上方约1mm厚的液层已保持吸附剂的润湿。在固相萃取柱上方加装储液器，将样品提取液加入储液器，抽真空，提取液完全通过固相萃取柱后，继续保持抽真空状态大约30min。以5mL乙腈淋洗固相萃取柱，收集洗脱液[6]。

将洗脱液在50℃下氮吹至干，分别加入300μL衍生化试剂1和200μL衍生化试剂2，涡旋均匀后室温反应20min，以乙腈定容至1mL，按色谱条件进行测定。

3 结果与讨论

3.1 色谱行为

在色谱条件下， AVM和EB衍生化产物的保留时间分别为11.3min、20.5min，峰形良好，见图1、图2，可见AVM和EB目标峰不受杂质及试剂的干扰，分离效果良好。

图1 AVM和EB标准溶液色谱图

图2 空白样品

3.2 工作曲线及检出限

表1 AVM和EB的线性方程、检出限和定量限

3.3 样品分析和回收试验

红枣样品中分别加入不同量的AVM、EB标准溶液，按实验方法经提取、净化、衍生后，按色谱条件进行测定[7-9]（见图3），回收率试验结果见表2。

图3 加标空白红枣样品

表2 AVM和IVM添加回收率及精密度试验结果

本方法结合了农业部781号公告-5-2006的方法，但本研究介绍的检测方法在样品前处理的过程中，衍生剂的用量、衍生时间均按照农业部781号公告-5-2006的方法进行，经过反复的实验证明，本方法在植物源食品中同时检测AVM、EB两种物质分类效果好，检测限能够满足日常检测的需求；与此同时，实验室结合日常检测任务，对不同生产厂家15批次沧州辖区内出口红枣分别利用本方法、SN/T 2114-2008的方法进行筛查检测，阴性样品、阳性样品检测结果分布一致[10-11]，阳性样品检出量相近，见表3。因此判断该方法检测AVM、EB结果可靠，可以应用于日常检测中。

表3 15批次样品中AVM、EB检测结果

（续表）

4 结论

本方法利用高效液相色谱荧光检测红枣中AVM、EB的残留量，该方法操作简单，灵敏度高、重现性好，适合于大批量样品检测。

［1］ 柳王荣，杨仁斌，黄尧，等. 甲维盐在水稻环境中的残留分析方法[J]. 农药，2005，05：18-20.

［2］ 章虎，钱鸣蓉，董程，等. 液相色谱法同时测定稻米中阿维菌素和甲维盐残留[J]. 浙江农业科学，2010，6：21-23.

［3］ 梁振益，李嘉诚，王永强. 高效液相色谱法同时测定阿-甲微乳剂中的阿维菌素和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐[J]. 海南大学学报（自然科学版），2007，04：11- 14.

［4］ 史陶中，马鑫，花日茂，等. 高效液相色谱-荧光法测定水中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐[J]. 环境化学，2010, 29(3)：542-546.

［5］ 张艳，吴银良，胡继业，等. 高效液相色谱荧光检测法测定蔬菜中残留的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐[J]. 色谱，2008，26(1)：110 -112.

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［9］Hou Xiaolin，Wu Yongning，Shen Jianzhong，et al. Multi-Residue Analysis of Avermectins in Bovine Liver and Muscle by Liquid Chromatography-Fluorescence Detector[J]. Chromatographia，2007，65：77-80.

［10］王蓓, 商军, 华贤辉, 等. 高效液相色谱法测定赛鸽用复方吡喹酮胶囊中吡喹酮和伊维菌素的含量[J]. 中国兽药杂志，2005，39 （9）： 16-18.

［11］武志雄, 胡江涛, 郑卫东. 猪肉组织中阿维菌素、伊维菌素残留的高效液相色谱-串联质谱法研究[J]. 四川大学学报( 医学版)，2010，41( 3) ：523-526.

Determination of Avermectin and Emamectin Benzoate in Dried Red Jujubes Using Precolumn Derivation with HPLC

Mao Peixin, Jia Fang, Sun Lei, Ji Wei
(Cangzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Cangzhou, Hebei, 061000)

Using HPLC with fluorescent detection,a multi-residue method was developed and validated for the simultaneous determination of marker residues of avermectin and Emamectin Benzoate in dried red jujubes. The samples were extracted by acetonitrile,and the avermectin and Emamectin Benzoate in the extract were purified by passing through HLB SPE column,derivated by 1-methylimidazole and trifluoroacetic anhydride in acetonitrile at room temperature subsequently. HPLC-FLD results showed that the calibration curves were linear within the working range of 5-100 ng/g for the two drugs. For the quantitative analysis, the limit of detection of the method for avermectin and Emamectin Benzoate was 2.5 ng/g, while the limit of quantitation for avermectin and Emamectin Benzoate was 5.0 ng/g respectively. The value of recovery of avermectin and Emamectin Benzoate were in the range of 82.4％-104.9％.

Ox Tendon; Avermectin; Emamectin Benzoate; HPLC; Multi-Residue Determination

O652.63