李圣彦， 郎志宏， 黄大昉

中国农业科学院生物技术研究所，农业部农业基因组学重点实验室(北京)，北京100081

启动子是指RNA聚合酶识别、结合和启始转录的一段DNA序列，通常位于基因上游。启动子是调控基因表达的“指挥棒”，它能够控制基因表达的水平、部位及方式。深入研究启动子功能对于了解生物的生长发育、防御系统、疾病等都有非常重要的意义。本文总结一些研究启动子的方法及研究进展，以期能够为启动子的研究提供参考。

1 启动子的克隆

1.1 启动子捕获(promoter trap)技术

启动子捕获技术是一种克隆启动子的方法。该方法最早应用于大肠杆菌［1］，后广泛应用于果蝇［2］、小鼠［3］和植物［4］等真核生物中。启动子捕获载体通常是一个包含报告基因的载体，在报告基因上游插入不同基因序列，如果可以驱动报告基因表达，则可判断插入片段具有启动子活性，进而从报告基因上游序列中分离出启动子序列(图1)［5］。

图1 启动子捕获载体示意图［6］Fig.1 A promoter trap vector diagram［6］.

启动子捕获载体必须要正确的插入到外显子中才能表达，然而启动子捕获载体插入到外显子的频率非常的低［3，7］，比增强子捕获载体的插入频率至少低200倍。因此启动子捕获载体通常含有筛选标记基因，如新霉素抗性基因(neo)或β-半乳糖苷酶-NeoR融合报告基因(图1)，增加筛选的准确性。启动子捕获技术能够产生大量的突变，从中可以筛选出大量的启动子序列。但是这种插入位点的选择有一定的偏好性，因此该方法不能够在全基因组范围内产生近乎饱和的突变。……