赵忠润， 陈 超， 黄娇芳， 俞 峰， 史吉平， 孙俊松*

1.白银赛诺生物科技有限公司，甘肃白银730914;

2.中国科学院上海高等研究院，生物炼制实验室，上海201210

1398食品级中性蛋白酶是一种利用枯草芽胞杆菌1398发酵产生的用于食品加工处理的中性蛋白酶［1］。国内生产厂家在采用枯草芽胞杆菌1398发酵生产中性蛋白酶时，发酵液粘稠，在后提取过程中无法用传统的板框压滤使固液分离，通常将发酵液连同菌体一起进行喷雾干燥得到产品［2］，这样的产品不仅酶活较低，而且有很大的臭味，因此限制了其在食品工业中的应用。目前高效的液体制剂只有外资企业能生产。1398中性蛋白酶的发酵原料主要由豆粕、麸皮、玉米粉等廉价原料组成，改变这些原料配方或发酵方式常用于提高产品单位酶活［3，4］，但是鲜有能够改善发酵液粘性及产品提取工艺的功效。因此，有必要系统地对1398中性蛋白酶的发酵液进行有效的菌液分离技术及蛋白质纯化工艺的研究，从而实现液体蛋白酶产品的工业化生产。

开发中性蛋白酶液体制剂的另一途径是通过对生产菌种进行物理化学方法的传统诱变［5，6］，以降低发酵液粘度或提高发酵液的单位酶活;或者利用基因工程手段，将1398中性蛋白酶基因构建到表达载体中，再重组到枯草芽胞杆菌的基因组内进行稳定的外源分泌表达［7，8］。其中，以分子生物学手段研究并对工业酶进行工程改造是工业酶的发展方向，它建立在对枯草芽胞杆菌转录组学、代谢网络调控等系统生物学及分泌表达系统、DNA重组系统等表达平台的研究基础上［9，10］。……