傅金英，于胜男，徐萌萌，李瑞丽，杜 蕾

(河南中医学院，郑州 450008)

绝经后妇女由于卵巢功能衰退，雌激素分泌减少，机体出现糖脂代谢紊乱、脂肪分布改变及骨钙丢失增加，容易患高血压、冠心病、糖尿病、骨质疏松等疾病[1]。我们在生活中发现，许多女性进入中年以后出现腹型肥胖;长期临床观察也发现，中年女性随着卵巢功能衰退，容易出现脂代谢紊乱，而受肾上腺调控的皮质激素与脂代谢异常及肥胖关系密切。本实验采用去卵巢雌鼠模型，通过观察“坤安煎剂”对去卵巢大鼠体质量及血清皮质酮水平的影响，验证卵巢功能衰退后是否会影响肾上腺轴(HPA轴)，并探讨中药对其干预作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

选用SPF级雌性成年Wister大鼠40只，体质量200±10 g，由山东鲁抗医药股份有限公司提供(实验动物质量许可证号SCXK(鲁)20080002)。实验室温度18±3℃，相对湿度70%。

动物适应喂养1周后随机分为4组:空白组不予任何处理;模型组摘除大鼠双侧卵巢，术后7 d给予生理盐水灌胃，10 ml/kg/次，连续8周;中药组摘除大鼠双侧卵巢，术后7 d给予中药“坤安煎剂”灌胃，10 ml/kg/次，相当于成人等效剂量的6倍，连续8周;补佳乐组摘除大鼠双侧卵巢，术后7 d给予补佳乐生理盐水混悬液(0.01 mg/ml)灌胃，10 ml/kg/次，相当于成人等效剂量的6倍，连续8周。

1.2 药品和试剂

坤安煎剂组成:北沙参15 g，山茱萸15 g，枸杞20 g，地骨皮 15 g，女贞子15 g，旱莲草 30 g，知母 15 g，黄柏 12 g，黄芪 30 g，茯苓15 g，杜仲20 g，淫羊藿30 g，煅龙骨 30 g，煅牡蛎 30 g，丹参30 g，酸枣仁 30 g，由河南省中医院制药室提供，1 ml相当于3.52 g生药，4℃冰箱保存备用;盐酸氯胺酮注射液2 ml，0.1 g/支，由福建古田药业有限公司提供(生产批号H35020148)。注射用青霉素钠80万单位/支，由华北制药股份有限公司提供(生产批号H13020657);生理盐水500 ml/瓶，由河南太龙药业股份有限公司提供(生产批号H41023506);补佳乐戊酸雌二醇片由法国Delpharm Lille SAS提供(生产批号J20080036);皮质酮(CORT)酶联免疫吸附测定试剂盒，由伊莱瑞特生物技术有限公司提供。

1.3 仪器

AG204型电子天平，动物天平(上海精密仪器仪表有限公司)，80-2型离心机(上海云楼医用仪器厂)，电热恒温水浴箱(HI-I·W21·Cu660型上海医疗器械厂)，－80℃超低温冰箱(美国)，光学显微镜(上海光学仪器厂)。

1.4 动物模型复制

用5%盐酸氯胺酮注射液将大鼠腹腔注射麻醉(用量100 mg/kg)，切开皮肤及肌肉层1-1.5 cm，找到双角管状子宫，沿子宫可找到卵巢，将双侧卵巢摘除止血，再将牵拉出的输卵管及子宫轻轻放回腹腔。缝合腹肌和皮肤，术后肌肉注射青霉素每只每天20万U，连续3 d。大鼠摘除卵巢后3 d，逐只进行阴道脱落细胞涂片检查，每天1次，连续5 d，显示动情周期紊乱，证明去卵巢成功。

1.5 大鼠称重及血清皮质酮(CORT)水平测定方法

末次给药24 h后称取各大鼠体质量。腹腔麻醉后腹主动脉取血5 ml，分离出血清，－80℃保存，用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清皮质酮(CORT)水平，检测方法严格按试剂盒说明书进行操作。

1.7 统计学方法

采用SPSS 18.0统计软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析，所有数据以均数±标准差(s)表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

结果表明，大鼠卵巢切除后体质量明显升高，与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.01);补佳乐组大鼠体质量有降低趋势，但与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05);中药组大鼠体质量明显降低，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05);中药组与补佳乐组比较体质量降低，但差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 各组大鼠体质量及血清CORT比较(s)

表1 各组大鼠体质量及血清CORT比较(s)

注:与空白组比较:▲P＜0.01;与模型组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与补佳乐组比较:△P＜0.01。

组 别 例数 体质量(g)血清CORT(pg/ml)10 318.70±27.29 102.92± 3.93模 型 组 10 390.88±38.92▲ 205.62± 3.54▲△中 药 组 10 357.30±36.05* 170.79± 4.36＊＊▲△补佳乐组 10 378.50±24.05▲ 151.52±25.51空白组＊＊▲

大鼠卵巢切除后血清皮质酮(CORT)水平明显升高，与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.01);中药组及补佳乐组大鼠血清CORT水平明显降低，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01);中药组与补佳乐组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。

3 讨论

更年期综合征(Climacteric Syndrome，CS)是临床常见病、多发病，是妇女在绝经前后因卵巢功能逐渐衰退以致雌激素水平下降所引起的以植物神经功能紊乱代谢障碍为主的一系列证候群，属于中医“绝经前后诸症”范畴[2]。《素问·上古天真论》曰:“……七七任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭，地道不通，故形坏而无子也。”中医认为，妇女49岁左右，肾气渐衰，天癸将竭，任冲二脉虚衰，肾阴亏虚，阴不敛阳，阳浮于外，阴阳平衡失调，所以主要表现为肾阴虚，而“阴累及于阳”，致阴阳两虚影响心、肝、脾等脏，从而发生一系列的病理变化而引起绝经前后诸症。近期主要表现为潮热、出汗、心悸、抑郁、失眠等，远期可致骨质疏松、泌尿生殖道改变、老年痴呆及心血管疾病发病率增加[3，4]。治疗以补肾滋阴为主，兼以温阳养血、益精填髓。本次研究所用方“坤安煎剂”是导师傅金英教授在基础研究及大量临床经验中总结出的经验方，由经方“知柏地黄丸”合“二至丸”加减化裁而来。方中北沙参、知母、黄柏滋阴降火;地骨皮退虚热;山茱萸、杜仲、枸杞、女贞子、旱莲草补益肝肾、益精填髓;淫羊藿补肾壮阳;丹参活血化瘀;煅龙骨、煅牡蛎敛汗固精、镇静安神;酸枣仁养心安神;黄芪、茯苓益气健脾。诸药合用切中病机，共奏补肾填精、调理气血、平衡阴阳之功效。

皮质醇(cortisol，CORT)是从肾上腺皮质中提取出的对糖类代谢具有最强作用的肾上腺皮质激素，属于糖皮质激素的一种，鼠类皮质醇含量较少，而以皮质酮为主。CORT的分泌水平受HPA轴调控，HPA轴活性被认为与肥胖等的发生有关，且CORT可以拮抗生长激素和性激素对外周脂肪组织的作用，促进腹部脂肪的堆积，可见中心性脂肪堆积，即腹型肥胖多数是CORT分泌增加的结果。Phillips[5]等报道，早晨血皮质醇水平升高，并与糖耐量异常、胰岛素抵抗、高脂血症、高血压相关，脂肪组织和肝脏皮质醇代谢异常可能在中心型肥胖和代谢综合征发病中发挥重要作用。代谢综合征(metabolic syndrome，MS)为临床综合征，包含多方面的要素:腹型肥胖、胰岛素抵抗、血脂异常、血压异常、糖耐量异常等[6]。殷元万等[7]研究中发现，代谢综合征患者午夜血清皮质醇水平与腰围、体质量指数、收缩压、空腹血糖、甘油三酯呈正相关，与高密度脂蛋白、胆固醇呈负相关。另外，CORT在各种应激状态下大量释放，能直接影响糖、蛋白质、脂肪等三大营养物质代谢，通过“许可作用”保持血管平滑肌对去甲肾上腺素的敏感性，从而对心血管系统产生影响[8]。叶林秀等[9]在冠心病患者唾液皮质醇水平与糖代谢状况的研究中发现，冠心病患者皮质醇水平显著升高。汤圆圆等[10]研究发现，急性心肌缺血大鼠CORT含量明显升高。总之，皮质酮水平与血脂代谢紊乱、心血管疾病的发生密切相关。

本研究发现，大鼠去卵巢后可引起血清皮质酮水平的升高和体质量的增加，验证了我们之前提出的关于女性绝经后由于卵巢功能衰退进而影响到HPA轴的一个假说，提示益肾填精中药“坤安煎剂”可能通过调节血清皮质酮水平改善去卵巢大鼠血脂代谢紊乱等情况，为临床研究提供了实验支持。但连接HPO-HPA轴的纽带及其机制尚待进一步的研究发现。

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