张伟武，杜爱芳

(1.浙江大学动物预防医学研究所，浙江省动物预防医学重点实验室，浙江杭州310058;2.杭州市农业科学研究院)

肉鸡球虫病是危害肉鸡生产的主要疫病之一，在我国因鸡球虫病引起的年损失约为10 多亿元［1］。自20 世纪40年代磺胺类药物用于防治鸡球虫病以来，已先后有40 多种药物投入实际应用，但任何一种抗球虫药物长期使用都会产生抗药性。因此，人们将目光转向非抗生素防治研究，如中药和疫苗［2］。近10年来，国内外相继研制开发球虫疫苗，如美国的Coccivac、加拿大的Immucox、英国的Paracox、捷克的Livacox［3］、中国的DLV 等，保护效果良好，但仍有某些不足之处。故目前防治鸡球虫病仍主要通过饲料中添加抗球虫药物进行预防。

绿源素是一种中草药提取物和竞争排斥益生菌组成的复合饲料添加剂，笔者曾采用该产品对黄羽肉鸡生产性能和免疫功能影响及雏鸡接种益生菌对肠道菌群的影响等进行了研究［4-6］。为更好了解其预防鸡球虫病的效果特进行本试验，以便为寻求解决球虫抗药性问题提供新途径。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 球虫虫株 采自杭州富阳某肉鸡场。现场采集新鲜鸡粪，经实验室分离、纯化与增殖柔嫩艾美尔球虫卵囊后备用。

1.1.2 试验动物 1日龄AA 肉鸡，浙江大学正大肉鸡发展中心提供;试验饲料为自配全价肉鸡料，不含抗球虫药。

1.1.3 试验药物 杜球(含1%马杜霉素)，批号0806004;克球(含0.5%地克珠利)，批号0806002;抗球(含6%癸氧喹酯)，批号0806001;均由浙江某动物保健品有限公司生产;盐霉素，生产批号080616;绿源素、甜菜碱均由浙江某饲料添加剂公司提供。

1.2 试验设计

1.2.1 柔嫩艾美尔球虫卵囊的采集、分离、纯化与增殖 采集4～6 周龄肉鸡的新鲜粪便，用饱和食盐溶液漂浮法分离卵囊，将混合卵囊孢子化后，用水洗净重铬酸钾后计数，感染10～14日龄鸡10 羽，每羽口服5 ×104～1 ×105个孢子化卵囊，感染后5 d 剖杀，刮取盲肠内容物收集裂殖子，再感染5 羽10～14日龄无球虫感染鸡。接种后2～3 d 剖杀，从盲肠内容物收集卵囊。经水冲洗后加入重铬酸钾，孢子化后备用。

1.2.2 试验分组 试验设10 组，即杜球组、克球组、盐霉素组、抗球组、绿源素1 组、绿源素2 组、绿源素+甜菜碱1 组、绿源素+甜菜碱2 组、不感染不用药组、感染不用药组。

1.2.3 试验方法 供试肉鸡自出壳至试验结束，均笼养在无球虫环境下，每组12 羽(6♂、6♀)。按试验要求分别饲喂含预防球虫药的饲料，柔嫩艾美尔球虫卵囊13日龄经嗉囊接种0.5 mL(1 ×105个)。试验期间，每日观察粪便状态、出血程度及雏鸡表现，记录鸡只精神状态、饮水、食欲、发病率、死亡数、粪便状况。接种卵囊后第5～7 d，每天更换垫纸，记录血便，按1 堆血便记1 分［7］。同时称取每组排出的粪便量，搅匀后取样，用麦氏虫卵计数法计数各组粪便卵囊数(OPG)。试验于接种卵囊后第8 d 结束，逐只称重后剖杀，检查盲肠病变，按Johnson and Reid 方法(1970)［8］进行盲肠病变计分。

1.3 疗效判断 计算各组存活率、相对增重率、平均病变记分、病变值及卵囊值，最后计算抗球虫指数(ACI)。依此对药物效果进行判定。ACI ＜120 不宜作抗球虫药;ACI =120～160 抗球虫效果低;ACI=160～180 抗球虫效果中等;ACI ＞180 抗球虫效果高效［9］。

1.4 测定指标

存活率(%)= 组内存活鸡数/组内总鸡数×100;

相对增重率(%)=感染投药组增重/不感染不投药组增重×100;

病变值=各组平均盲肠病变计分×10;

卵囊值以各组盲肠内容物OPG，参照角田清相关表格(1986)［10］换算成卵囊值;

ACI=(存活率+相对增重率)－(病变值+卵囊值);

粪便记分=(第5～7 d 血便记分数÷鸡数)。

2 结果与分析

绿源素与甜菜碱配合应用预防肉鸡球虫病效果，详见表1、表2。

表1 不同抗球虫药物预防肉鸡球虫病的抗球虫指数统计表

由表1可知，各组的初始平均体重相近(最大差距仅13 g)，末重则差距达39.5 g;相对增重率以杜球组最高(102.98%)，说明其促生长作用明显;抗球组其次(100.98%)，绿源素+甜菜碱组的相对增重率为97.92%～98.38%。存活率则以盐霉素组最低(83.33%)，杜球组、克球组和绿源素组均为91.67%，抗球组和绿源素+甜菜碱组均为100%。抗球组的盲肠病变值和卵囊值均为0，杜球组与克球组卵囊值均为10，但杜球组的盲肠病变值则明显低于克球组;盐霉素组、绿源素组和绿源素+甜菜碱组的卵囊值均为20，盲肠OPG 均很高，与感染不用药组相比则降低了70.59%～77.54%，但盲肠病变值各组差异较大，与盐霉素组相比，绿源素组平均降低38.16%，绿源素+甜菜碱组平均降低67.11%。抗球虫指数的综合指标以抗球组最高，其次为杜球组，抗球虫效果均达高效。绿源素+甜菜碱组的平均ACI 为171.95，高于克球组，达到中等有效水平，绿源素组的平均ACI 为149.06，低于绿源素+甜菜碱组的平均值，但高于盐霉素组10.39%，其抗球虫效果低于中等有效水平。

表2为各组粪便OPG 及血便记分。各组中仅有不感染不用药组和抗球组未发现血便，粪便中卵囊数几乎为零，杜球组有轻微血便出现，粪便中检测到有少量卵囊，其余各组均有不同程度的血便，粪便OPG 均偏高，用药组中盐霉素组平均血便记分最高(2.50)，绿源素组次之达2.13，绿源素+甜菜碱组的平均血便记分为0.96，低于克球组32.39%，较绿源素组降低54.93%。

表2 各组的粪便OPG 及血便记分

3 小结与讨论

3.1 抗药性与药物使用年限及使用频率关系 本次试验结果显示，癸氧喹酯、马杜霉素、地克珠利和盐霉素的抗球虫指数依次为200.98，182.15，161.94 和133.57，药效高低可以反应球虫对其产生的抗药性程度。盐霉素于20 世纪80年代引入我国，在杭州地区使用年限最长，但其低廉的用药成本仍然受到众多饲料生产厂家的欢迎，使用频率较高，抗药性也最严重。地克珠利是相对较新的高效化学合成抗球虫药，20 世纪90年代后期开始上市，饲料中添加量很低，一般用于穿梭、轮换用药;马杜霉素20 世纪90年代初开始上市，其抗球虫效果在几种离子载体抗生素类抗球虫药中最好，也是目前市场占有率最大的抗生素类抗球虫药;癸氧喹酯是喹啉类抗球虫药，最新上市，而且由于此类药品的用药成本较高，一般多使用于球虫高发期和高发地区，故该药仍然保持着较高敏感性。

3.2 绿源素预防肉鸡球虫病效果评价 绿源素是中草药提取物与竞争排斥益生菌(CE)组成的复合饲料添加剂，能有效阻断病原菌的定植，预防继发感染，刺激免疫器官生长发育，提高循环抗体水平，在提高肉鸡生产性能方面能取得与抗生素(金霉素)相类似的效果。绿源素是目前所发现的最强效的抗氧化剂和自由基清除剂，在食品、保健品、化妆品及医药领域应用广泛;竞争排斥益生菌对预防和控制禽类沙门氏菌方面有很好的效果，目前国内外已有20 多个产品应用于养禽业［11］。试验表明，雏鸡接种益生菌能在肠道中成功定植，导致盲肠内乳酸杆菌增多、大肠杆菌明显减少，菌群结构产生明显变化，并表现趋益性，效果比较理想，但此类产品用于预防肉鸡球虫病在国内外未见相关报道。本次试验结果显示，绿源素平均ACI 为149.06，卵囊值为20，粪便、盲肠OPG 较高，平均血便记分为2.13，表明其不能有效杀灭球虫，抗球虫效果低于中等有效水平［12］。但与供试的4 种抗球虫药相比，绿源素在保证雏鸡存活率方面与马杜霉素、地克珠利相同，明显高于甲基盐霉素，相对增重率也优于盐霉素，盲肠病变值明显低于甲基盐霉素、地克珠利，表明绿源素可较好地促进受球虫感染鸡的增重和饲料转化率，减轻肠道病变，防止肠粘膜受损及继发感染。

3.3 绿源素与甜菜碱配合使用效果评价 绿源素单独用于抗球虫效果一般。本次试验中绿源素与甜菜碱配合使用，结果表明ACI 为171.95，其抗球虫效果达到中等有效水平，与绿源素单独使用相比，相对增重率、存活率和盲肠病变值均有明显改善，平均血便记分降低54.93%。表明绿源素与甜菜碱配合使用抗球虫效果已达到中等有效水平以上。绿源素与甜菜碱配合使用具有良好的协同作用，另有试验结果表明，饲料中添加甜菜碱尤其是与离子载体类抗球虫药合用，可明显改善感染球虫患鸡的生长性能和抵抗力，这一作用与甜菜碱独特的生物学活性密切相关;球虫感染时造成肠道粘膜上皮细胞崩解和肠管发炎，细胞内K+释放使血钾升高，进而使血钠下降，使肠道内离子和渗透压失去平衡［13］，从而达到抑制球虫侵害和减轻肠道病变的目的，且有使用方便，长期使用不会产生毒副作用等优点。

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