吴 丹 ，聂燕钗 ，曹 禹 ，曹 渊 ，周怀谷

（1.上海市公安局物证鉴定中心 法医物证学现场应用技术公安部重点实验室 上海市现场物证重点实验室，上海 200083；2.复旦大学上海医学院，上海 200032；3.无锡中德美联生物技术有限公司，江苏 无锡 214174）

人类线粒体DNA（mtDNA）是位于细胞核以外的唯一基因组DNA，具有突变率高、遵循母系遗传的特点，与每个体细胞核DNA只有两个拷贝相比，其mtDNA则有成百上千个拷贝，因此，对那些因微量、降解、腐败等原因而造成核DNA分型失败的生物检材进行mtDNA检测分析成为法医物证领域又一重要的技术手段[1]。同时，在母系亲缘关系认定、大型灾难调查、考古研究等方面，mtDNA检测分析也显示出良好的应用前景。目前常规的mtDNA检测方法仍然是对其高变区的直接测序，存在步骤繁琐、费时费力、测序区段有限等缺陷，大大影响了mtDNA在法医物证领域的研究和应用。

本研究利用单核苷酸多态性（SNP）遗传标记分布广泛、遗传稳定、分析片段短、可实现高通量、自动化检测等特点[2]，结合等位基因特异性引物扩增和毛细管电泳检测，开发建立一种16个mtDNA SNP的复合检测体系，对mtDNA进行简便、有效的高通量分型提供一种新的技术手段。

1 材料与方法

1.1 材料

50份汉族无关个体FTA卡血液样本，通风干燥处保存。

1.2 主要仪器与试剂

QIAcube多功能全自动样本制备工作站（德国QIAGEN公司），9700型PCR扩增仪（美国AB公司），7500实时荧光PCR仪（美国AB公司），3130XL遗传分析仪（美国AB公司），Quantifiler DNA定量试剂盒（美国 AB 公司），Wizard®DNA Clean-up System（美国 Promega公司），BigDye Terminator Cycle Sequencing试剂盒（美国AB公司）。

1.3 提取DNA与定量分析

应用QIAcube多功能全自动样本制备工作站提取FTA卡血样DNA，详见使用说明。……