张思春，杨凡力，余 乐，何 彪，涂长春

(军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，吉林 长春 130122)

蝙蝠是地球上仅次于啮齿类的第二大类哺乳动物。目前发现的4600个哺乳动物物种中，有942种(约占20%)为蝙蝠[1]。蝙蝠被认为是许多新发人兽共患病病毒如尼帕病毒[2]、亨德拉病毒[3]、SARS冠状病毒[4]等的自然储存宿主。在中国菊头蝠体内发现的SARS-样冠状病毒(SARS-like coronaviruses，SL-CoVs)引发人们尝试在不同的蝙蝠物种中分离SL-CoV病毒。目前从蝙蝠组织中已经检测到至少66种病毒，但由于缺少蝙蝠细胞系，利用其它哺乳动物的细胞系来分离蝙蝠病毒较困难，所以分离出的病毒株较少。

从动物组织器官分离到的原代细胞在体外进行有限的增殖后会进入衰老期，称为Hayflick限制。但包括病毒癌基因在内的多种因子可以延长细胞的生命周期，甚至使细胞在体外无限增殖，建立永生化的细胞系。Crameri等通过转导SV40 LT抗原或人端粒酶催化亚基(hTERT)基因进入中央狐蝠(Pteropus alecto)的脑、肺、肾等组织细胞中，建立了几种永生化的蝙蝠细胞系[5]。Krahling等转移腺病毒血清5型的E1A基因到北非果蝠(Rousettus aegyptiacus)胎儿细胞中，建立了R06E细胞系，并用于马尔堡病毒的研究[6]。本研究将SV40 LT基因导入原代蝙蝠胎儿肾细胞(Bat fetal kidney cell，BFK)中，建立了能够在体外长期传代培养的永生化细胞系。

1 材料和方法

1.1 质粒、细胞和病毒株 pBABE-puro-SV40 LT质粒由Addgene公司惠赠；pVSV-G质粒及GP2-293细胞购自Clontech公司；小鼠神经瘤N2a细胞、Marc-145细胞、Vero-E6细胞由本实验室保存；蝙蝠西江病毒(XRV)和蝙蝠轮状病毒RVA/Bat/MSLH14株由本实验室分离并保存。……