李海玉，陈兴凤，余思颖，刘革力，宋方洲

（重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心，生物化学与分子生物学教研室，重庆 400016）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是中国南方省份及东南亚地区比较常见的恶性肿瘤，尤其是我国广东、广西，具有明显的种族聚集性和地域性。研究表明NPC的发生发展是多因素作用的结果，其中许多重要基因参与其发生发展的过程，已报道MMP9、VIM等基因的异常表达促进了鼻咽癌的发生。因此，研究和鼻咽癌发生相关的基因，将有助于进一步揭示鼻咽癌的发病机制及预后。

Bmi-1（B-cell-specific moloney murine leukemiavirus insertion site 1，Bmi-1）基因是1991年在鼠淋巴细胞发现的多梳基因（polycomb group genes，PcG）家族的重要成员之一［1］。Bmi-1广泛表达于多种肿瘤中并与肿瘤的发生发展密切相关，例如乳腺癌［2］、前列腺癌［3］、胰腺癌［4］等。有学者发现鼻咽癌中Bmi-1的mRNA及蛋白水平表达均较高，表明Bmi-1与鼻咽癌进展及转移有关［5］。为了进一步研究Bmi-1与鼻咽癌侵袭迁移的关系，采用小干扰RNA技术沉默鼻咽癌细胞株CNE-1中Bmi-1的表达，观察沉默Bmi-1表达后，CNE-1细胞生物学行为变化，为探讨Bmi-1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 RPMI 1640培养基、胎牛血清购自Hyclon公司。RT-PCR试剂盒、qRT-PCR试剂盒购自TaKaRa公司。Total RNA提取试剂盒购自OMEGA公司。Opti-MEM、Lipofectamine RNAiMAX购自Invitrogen公司。Negative control siRNA、BMI-siRNA-269由上海吉玛基因公司合成。Bmi-1、β-actin的引物由上海生工生物公司合成。小鼠抗人的Bmi-1单克隆抗体购自Upstate公司，小鼠抗人β-actin单克隆抗体、HRP标记的羊抗鼠IgG购自Santa Cruz公司。Matrigel胶购自Bio-Rad公司，Transwell小室购自Millipore公司。

1.2 细胞培养 CNE-1细胞由重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心保存。采用含10%胎牛血清、1×105U·L-1青霉素和100 mg·L-1链霉素的RPMI 1640培养基，置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。……