红外分光光度法鉴别阿苯达唑原料

2014-05-05章安源张志民李淑花刘道中山东省兽药质量检验所济南250012

山东畜牧兽医 2014年4期

章安源张志民李淑花刘道中（山东省兽药质量检验所济南 250012）

红外分光光度法鉴别阿苯达唑原料

章安源张志民李淑花刘道中（山东省兽药质量检验所济南 250012）

本研究建立了阿苯达唑快速、专属的鉴别方法。分别采用直接检测样品法和以乙醇为溶剂进行提取法，进行红外鉴别。作精密度和比对分析。乙醇提取法在含量测定、与标准图谱相似度较直接监测样品法有统计学差异(P＜0.05)。结果表明，本法专属性好，可准确地鉴别本品。

红外分光光度法阿苯达唑溴化钾

阿苯达唑(abendazuo)为抗蠕虫药，对于其原料药鉴别方法为一般的化学反应和红外吸收图谱。而红外吸收光谱是有机化合物的重要特征之一，具有高度的专属性和特异性，是药品检验中鉴别有机药物的重要方法。“英国药典2009凡例Ⅱ[1]中说明当红外鉴别用于需要一定预处理样品时，有可能无法达到严格一致，此时样品光谱需与对照光谱大致相同”。为快速有效地鉴别阿苯达唑原料药，本文研究了用两种不同方法处理阿苯达唑，对两种方法作一定的评价。

1 材料和方法

1.1 仪器与试药傅立叶65红外分光光度仪(美国PE公司)、UV-2550紫外分光光度计(日本岛津公司)、BT125D电子天平(美国赛多利斯公司)。阿苯达唑对照品(中国药品生物制品检定所、批号100373-200502，纯度100.0%)、阿苯达唑原料(常州亚邦齐晖医药化工有限公司，批号60118327、60112471、60112017)，无水乙醇、溴化钾均为分析纯。

1.2 方法（1）直接制备对照品片及供试品(简称方法1)：将溴化钾在120℃干燥5h后，取溴化钾约300mg，置玛瑙研钵中研细，压片，作为溴化钾空白片。目测，空白片呈透明状，上机后谱图显示基线透光率大于75%。取阿苯达唑对照品与样品各约0.5mg，分别与经干燥的溴化钾约70mg，置玛瑙研钵中混合，研细后压片，制得对照品，供试品。上机后，扣除空白片背景后，光谱图显示基线透光率大于80%。制备的对照品和供试品透光率均符合红外图谱要求。（2）处理后制备对照品片及供试品(简称方法2)：根据阿苯达唑在丙酮中微溶，在乙醇中几乎不溶，在水中不溶的性质，选择以无水乙醇溶解[2]。取对照品和供试品适量，分别溶于无水乙醇中，研磨使溶解，滤过，滤液置水浴上蒸干后，105℃干燥1h后[3,4]，取残渣，滴加1ml左右液状石蜡，置研钵中研成均匀的糊状物，取适量糊状物均匀涂抹与两个空白溴化钾片之间，制得对照品和供试品。二者的光谱图显示基线透光率大于80%。符合检测要求。

1.3 统计学分析采用spss10.0统计软件，检测数据以x±S表示，两种方法比较用t检验，以P＜0.05为差异显著。

2 结果

2.1 精密度试验对照品和供试品各3批，每批进行2个样品平行试验，同一天不同时间、不同天重复3次，所得红外谱线基本一致[5]。

2.2 稳定性试验取对照品和供试品各3批，放入干燥器，每隔1h测定1次，12h内所得所得红外图谱基本一致。

2.3 重复性试验取对照品和供试品按每批进行2个样品平行试验，连续测定3批，重复3次。所得红外谱线基本一致。

2.4 样品的含量测定取两种方法制下制备合格的对照品和供试品，按《中国兽药典》紫外-可见分光法测定阿苯达唑含量，所有对照品和供试品含量均合格，符合红外光谱测定的要求。（1）对照品和供试品分别用两种不同的处理方法(方法1和方法2)连续进行18次盲测，经t检验分析，结果表明两种不同方法测定对照品的含量值之间无统计学差异(P＞0.05)；不同方法测定供试品的含量值之间的总体差异有统计学意义(P＜0.05)。结果见表1。

表1 二种不同前处理方法测定含量(±S) (%)

注：*P＜0.05，下表类同。

测试方法对照品供试品方法1 99.9±0.10 99.2±0.05方法2 100.0±0.01 99.4±0.26*

2.5 对照品和供试品红外图谱测定经过计算机对多次测定得到的对照品和供试品红外图谱进行平均化处理，作为红外标准图谱[6]，见图1、2、3、4、5。

图1 对照品(方法1)

图2 供试品(方法1)

图3 对照品(方法2)

图4 供试品(方法2)

图5 阿苯达唑标准图谱(兽药典)

2.6 数据处理标准化后的对照品和供试品图谱与2010版《兽药典》提供的阿苯达唑标准图谱进行比较。计算机自动计算其相似度，相似度最低限的阈值为90%.0[6]。这些数据可以作为评价方法1和方法2是否对红外图谱有影响。经t检验分析，结果表明两种不同前处理后测得的对照品图谱与标注图谱之间差异不显著(P＞0.05)；两种不同方法处理的供试品图谱与标准图谱之间差异显著(P＜0.05)。结果见表2。

表2 两种不同前处理方法后的谱线比对试验(x±S) (%)

3 讨论

（1）精密度反映实验结果的重现性，其中批内精密度反映的同1份标本在一天内使用同一试剂不同时间点检测结果的重现性，批间精密度反映的是同1份标本在不同天内检测结果的重现性，二者都对实验室结果常规检测质量的评价有重要影响[5]。本试验设计对照品和供试品分别检测3批，每批2个平行样品，重复3次，从结果表2中可以看出，本试验对两种不同方法处理过的对照品和供试品的图谱相似度的批内、批间CV均小于5%，重复性好，两种方法总体间CV符合情况很好，可以满足红外图谱测定要求；可能是方法2前处理包括药品的提纯及干燥去水的过程，而且制片为非传统的石蜡糊法制片，因而检测的重复性好，从而可以大大提高红外检测的灵敏度和分析的特异性。是一种较理想的测定方法。从表1和表2结果显示方法2处理过的供试品无论是含量还是与标注图谱的相似度两个指标都较方法1差异显著(P＜0.05)。（2）红外分光光度法已广泛应用于药物的定性鉴别中。而光谱图的质量很大程度上取决于样品的制备。对于原料药可直接取样压片，但如果测得的光谱图与《药品红外光谱集》所收载的对照图谱不一致时，在排除可能影响测定的外在因素后，可按该药物光谱图中备注的方法或药品标准中该品种项下规定的方法进行预处理后，再录制光谱图与对照图谱比对[7]。本试验对分析得到的阿苯达唑图谱与兽药典提供的标准图谱进行了对比，阿苯达唑供试品未经处理(方法1)直接压片后得出的红外图谱与《兽药红外光谱集》所收载的标准图谱在1380cm-1处的吸收峰有差异，与标准图谱比较相似度在91%左右。分子的红外光谱是发生红移还是蓝移，是多种因素综合作用的结果[8]。目前由多晶型药物引起红外光谱的差异占全部晶型药物的数量还很有限[9]。丙酮作粉碎或分散促进剂情况下，往往会加速晶型转变[10]，多晶型的变化会导致红外光谱的差异，因此，当红外光谱不一致时，首先应考虑样品的纯度是否符合要求，不纯的样品杂质检出率有时可低至1%[11]。所以本试验设计乙醇提取后既能提取有效成份，也可能除去了绝大部分的辅料，而且去掉部分辅料，供试品的纯度较高，结果显示供试品图谱的相似度较方法1有提高(P＜0.05)。（3）另外水分的存在也会使红外谱图失真，也应考虑采取有效的方法去除水分的干扰。无论是原料药还是制剂的提取物，对于非挥发性或熔点较高(105℃以上)的样品在压片前均应进行干燥处理[12]。阿苯达唑的熔点在206～212℃，所以经过溶剂提取后作者又根据供试品自身的理化性质采用了105℃，时间在1h。（4）虽然在粉剂样品制样中，压片法是最优先选用的方法，但易受潮或空气而产生化学反应，重现性差，用方法2处理过的样品是使用的石蜡糊法，试验的稳定性良好[13]，这是因为石蜡里的油质能包裹住研磨好的粉状样品的颗粒表面，样品如糊状平铺于两块空白溴化钾空白片之间，能够对样品形成保护的外环境，容易得到稳定不变的红外光谱图。（5）经过方法2处理后的对照品和供试品，测得的红外谱线，与标准图谱进行比较，供试品图谱与标注图谱相似度均在 93.0% 左右，并且特征峰明显，重现性好。证明了应用红外鉴别阿苯达唑原料的可行性。因此推断，辅料和水分均有可能干扰阿苯达唑的红外分光光度法测定。

由图可见，经过处理(方法2)过的阿苯达唑供试品与《兽药红外光谱集》所收载的标准图谱大体一致。因此，本法可作为阿苯达唑原料的鉴别方法之一，省时，准确。从而更好地为检测红外的任务服务。

[1] 于大海, 苏佳妍. 关于英国药典中制剂的红外光谱鉴别方法的讨论[J]. 药物分析杂质, 2011(4)∶ 31.

[2] 中国兽药典委员会. 中国兽药典[S]. 北京∶中国农业出版社. 2010∶113.

[3] 吕红. 红外分光光度法鉴别贝诺酯片[J]. 黑龙江医药, 2008(5)∶ 21.

[4] 葛晓莹, 余振喜, 杨敏智. 红外分光光度法鉴别盐酸二甲双胍片和盐酸乙胺丁醇片[J]. 中国药师. 2012(1)∶ 15.

[5] 谭爱华.ELISA法检测中应注意的问题[J]. 应用医技杂志. 2008(19), 15.

[6] 马欣, 李洪宇, 张丽华. 中药柴胡与其伪品的红外鉴别[J]. 北华大学学报(自然科学版). 2012(2)∶ 13.

[7] 李夏林. 红外分光光度法在药品鉴别试验中的制样技术分析[J].北方药学. 2011(5)∶ 8.

[8] 李莉娟, 孙凤久, 楼丹花等.纳米氧化铝的晶型及粒度对其红外光谱的影响[J]. 功能材料, 2007(38)∶ 3

[9] 李志万.药物晶型的分析方法[J]．中国兽药杂志, 2006(1)∶ 40.

[10] 殷萌, 杨锋, 张欣荣等. 药物多晶型的研究现状[J]．药学实践杂志, 2008(3)∶ 26.

[11] 李荣生, 王玉, 黄朝瑜等. 药品红外光谱鉴别中常见问题及分析[J]. 中国药品标准, 2012(5)∶ 13.