戴秀美 王清明 惠涌泉 王秋菊 常维山*

（①山东农业大学动物科技学院 山东 泰安 271018 ②山东菁华农牧发展有限公司 山东 诸城③ 山东诸城市皮毛动物研究所）

犬瘟热是犬类、毛皮动物和部分海洋哺乳动物的一种多发性、高度接触性烈性传染病[1]，病死率差异很大，为30%～80%。早期以双相热、结膜炎、支气管炎、卡他性肺炎、胃肠炎为特征，后期出现明显的神经症状，部分病例足垫过度角质化。自1973年我国首次发现犬瘟热以来，该病已给毛皮动物养殖业带来了巨大的经济损失，是毛皮动物养殖三大疫病之一。虽然犬瘟热疫苗在中国毛皮动物养殖业中得到了推广应用，但犬瘟热引起貂、狐和貉等毛皮动物死亡率仍然较高(平均23.2%)[2]。虽然有犬瘟热疫苗出售，但仍存在免疫失败现象。为了解使用激素后水貂犬瘟热免疫效果，2013年9～10月笔者对大连市、诸城市部分水貂养殖场进行了CDV血清学调查与分析。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 样品采集 2013年9～10月水貂出栏期间对诸城市和大连市部分水貂养殖场进行随机心脏采血取样，共100份血清。其中诸城市50份，大连市50份。水貂养殖场均使用齐鲁动物保健厂CDV-11株犬瘟热活疫苗进行犬瘟热的免疫。

1.1.2 主要试剂及仪器 CDV-Ab ELISA 48孔和96孔检测试剂盒(美国RB公司生产)、酶标仪、50ml移液枪、50ml排枪、300ml排枪、37℃温箱、湿盒、黄白枪头等。

1.2 方法

1.2.1 采血和血清分离 随机采集的100份血样，心脏采血后将离心管静置放置20min，后3000r/min离心3～5min，收集血清置于-20℃备用。

1.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) 按照美国RB公司CDV-Ab ELISA 检测试剂盒使用说明步骤进行，以96孔板为例，每板设置阴阳性对照8孔，并加入阴阳性各50ml；待测样本孔加待测样本10ml，再加样本稀释液40ml；然后阴阳性对照孔和样本孔每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100ml，用封板膜封住反应板，37℃温箱孵育60min。弃去液体，在吸水纸上拍干，每孔加入200ml洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，洗板5次。每孔加入底物A、B各50ml，37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50ml，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判定：临界值= 阴性对照孔平均值+0.15；阴性判定: 样品D450nm值<临界值者为犬瘟热病毒(CDV)抗体阴性；阳性判定：样品D450nm值>临界值者为犬瘟热(CDV)抗体阳性。

2 结果

诸城市部分地区采集的50份激素貂血清，CDV抗体平均阳性率为36%，本地区阳性率见表1。大连庄河市部分地区采集的50份出栏水貂血清，CDV抗体平均阳性率为32%，本地区阳性率见表2。

表1 山东诸城市部分地区CDV抗体阳性率 (%)

表2 大连庄河市部分地区CDV抗体阳性率 (%)

3 小结与讨论

犬瘟热是困扰毛皮动物养殖业发展的三大疫病之一，对使用过激素的水貂进行犬瘟热抗体的监测能够对犬瘟热免疫效果有比较直观的了解。于2013年9～10月间对山东诸城市和大连庄河市激素貂的100份血清进行了犬瘟热抗体ELISA检测。结果表明山东诸城市和大连庄河市激素貂的CDV抗体平均阳性率相近，为30%左右。在使用相同疫苗免疫的条件下，犬瘟热抗体阳性率与犬瘟热疫苗的免疫次数密切相关，已完成犬瘟热二次免疫的水貂养殖场的抗体阳性率明显高于只进行过一次免疫及未进行过免疫的。大连庄河市蓝店乡虽然进行过2次犬瘟热疫苗免疫，但其抗体阳性率仍然较低，主要原因可能是二次免疫时机不对，不能很好地掌握二次免疫间隔时间，导致免疫空白期的出现，造成免疫失败，犬瘟热抗体产生量低。

总之，犬瘟热的有效控制需要合理的疫苗免疫程序。本研究提醒水貂养殖户：规范、合理、严格的免疫接种至关重要，且一定要重视二次免疫，只有这样才能产生坚实的疫苗保护力，防止犬瘟热暴发造成不必要的经济损失。

[1]Martella V，Elia G，Buonavoglia C.Canine distemper virus [J]Vet Clin North Am Small Anim Pract, 2008, 38(4): 787-797.

[2]王珺玮.貂、狐、貉源犬瘟热病毒分离鉴定与分子生物学特性研究[D].南京: 南京农业大学, 2008