苏娇玲 李元涛 孟 馨

（深圳市妇幼保健院，广东 深圳 518000）

七氟醚分娩镇痛对新生鼠低氧缺血性耳蜗损害的影响研究

苏娇玲 李元涛 孟 馨

（深圳市妇幼保健院，广东 深圳 518000）

目的 七氟醚分娩镇痛对低氧缺血性耳蜗损害的影响。方法 健康雌性SD大鼠，随机分为三组：正常组，分娩窒息组，七氟醚组，七氟醚组在分娩时给与吸入2.4%七氟烷。观察各组大鼠MDA、NO、SOD变化以及听力域和毛细胞计数，结果 与对照组比较，模型组胎鼠血清MDA、NO明显增高，ABR阈值、SOD明显降低，毛细胞计数明显减少；与模型组相比，治疗组胎鼠血清MDA、NO明显下降，ABR阈值、SOD明显增高，毛细胞计数明显增多。结论 七氟醚母鼠分娩镇痛对新生鼠缺氧性耳蜗损害具有保护作用。

分娩窒息模型；七氟醚；耳蜗损害

围生期低氧缺血性脑损害（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是新生儿急性发病和幼儿慢性神经损害的主要原因。围生期胎儿宫内缺氧、或者在分娩过程中的一些因素导致新生儿窒息，会导致不同程度的新生儿缺氧缺血性脑损害。患儿会导致永久性神经功能障碍，包括听力障碍、脑瘫、智力发育障碍、和视力障碍等[1]。HIBD引起的神经后遗症治疗时间较久，并且费用昂贵，增加了家庭和社会的负担。目前临床上的预防措施主要采取出生后低温脑保护，疗效并不理想，因此医学工作者力图寻找HIBD发病机制并寻求更有效的防治方法。本研究建立前列腺素诱发孕鼠分娩模型，给予母鼠吸入七氟醚分娩镇痛，观察七氟醚分娩镇痛对低氧缺血性耳蜗损害的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

健康雌性SD大鼠，体质量180～220 g，从暨南大学动物实验中心购买，合格证号2010A035无耳毒性药物使用史。分为正常组（自然分娩），分娩窒息组（模型组），七氟醚组（治疗组），每组40只。大鼠饲养于SPF级动物室，室温21～25 ℃，相对湿度40%～70%的屏障系统内饲养。分娩窒息组通过建立前列腺素诱发分娩胎鼠窒息模型，正常组（自然分娩），分娩窒息组给与50%氧气，七氟醚组吸入2.5%七氟醚混合50%O2。

1.2 动物模型的建立

动物不控制饮食，发情期将雌性大鼠和雄性大鼠（比例为5∶1）同笼饲养，每天通过阴道涂片，镜下见到精子作为妊娠的第1天。选用妊娠21 d孕鼠为研究对象。

1.3 分娩模型建立

在妊娠第21天上午10点，对孕鼠管祠法给予前列腺素5 mg/kg 486个单位诱发24 h内分娩[2]。

1.4 分娩胎鼠窒息模型建立

在妊娠第21天上午10点，对孕鼠管祠法给予前列腺素5 mg/kg诱发24 h内分娩，有宫缩发作后，七氟醚组吸入2.5%七氟醚混合50%0持续吸入3 h，正常组（自然分娩）、分娩窒息组吸入氧浓度50%，氧流量2 L，持续吸入3 h。颈脱法处死母鼠，取子宫放在37 ℃水浴槽20 min后，迅速取出胎鼠，断脐带，擦拭身体（刺激呼吸），放在37 ℃恒温箱保暖。

1.5 检测指标

血清NO、MDA、SOD浓度测定及声波检查。每组40只新生大鼠心腔穿刺采血，离心分离血清20 ℃保存待用。血清NO的测定采用硝酸还原酶法，按照试剂盒说明操作。声波检查根据传统方法[3，4]。

1.6 统计学处理

采用SPSS18.0软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差（）表示，多组间比较采用方差分析，两两组间比较采用LSD-t检验。

2 结 果

2.1 各组鼠耳蜗听性脑干反应（ABR）阈值的影响

治疗组其ABR阈值比用药前明显提高，并且与正常对照组比较，差异显著（P＜0.05），正常对照组和模型组在整个期间ABR阈值无明显变化，见表1、表2。

表1 各组大鼠耳蜗ABR阈值的影响（）

表1 各组大鼠耳蜗ABR阈值的影响（）

注：*代表与正常组比较，P＜0.05

组别 n 给药前 给药后正常组 40 20.8±7.6 22.10±5.1模型组 40 77.5±3.6* 76.3±4.2*

表2 各组大鼠耳蜗ABR阈值的影响（）

表2 各组大鼠耳蜗ABR阈值的影响（）

注：#代表与模型组比较，P＜0.05

组别 n 给药前 给药后模型组 40 77.5±3.6 76.3±4.2治疗组 40 74.3±6.1# 40.9±3.4#

2.2 耳蜗铺片及细胞计数耳蜗铺片显示

模型组毛细胞数量下降，形态不清，排列紊乱；治疗组毛细胞数量也不高，与模型组比较，形态结构清楚，细胞残余量较高。外毛细胞计数与正常组比较（1106.78±76.29），模型组（532.16±165.72）明显降低（P＜0.05），与模型组比较，治疗组（749.76±102.14）外毛细胞计数分别明显升高，（P＜0.05）。

2.3 血清NO含量的测定结果

正常组、模型组、治疗组新生胎鼠血清NO含量分别为（9.8± 6.9）ng/mL、（40.5±15.7） ng/mL、（24.1±8.7）ng/mL，血清NO含量存在差别，有统计学意义（P＜0.05）；与对照组比较，模型组胎鼠血清MDA明显增高、SOD明显降低（P＜0.05）；与模型组比较，治疗组胎鼠血清MDA明显降低、SOD明显升高（P＜0.05），见表3、表4。

表3 各组大鼠血清NO的含量（）

表3 各组大鼠血清NO的含量（）

注：*代表与对照组比较，P＜0.05

groups n NO(ng/L) MDA(μmol/L) SOD正常组 40 9.8±6.9 4.3±0.9 139.1±16.6模型组 40 40.5±15.7* 6.8±0.6* 102.8±11.3*

表4 各组大鼠血清NO的含量（）

表4 各组大鼠血清NO的含量（）

注：#代表与模型组比较，P＜0.05

groups n NO(ng/L) MDA(umol/L) SOD模型组 40 40.5±15.7 6.8±0.6 102.8±11.3治疗组 40 24.1±8.7# 5.2±0.3# 141.5±10.4#

3 讨 论

新生儿HIBD缺氧缺血（如胎儿窒息）后脑损伤的发生病因较多比如：脑细胞高能磷酸耗竭及酸中毒；自由基的产生、炎性细胞因子的作用，非NMDA受体被激活，引起细胞水肿等等[2]。目前的研究发现七氟醚等多种麻醉药物可以通过以上途径预防和治疗缺血缺氧性脑损伤作用，另外临床上联合低温或α2受体激动剂等，对神经可以起到保护作用。

听觉系统分为外周部分和中枢部分。研究人员指出美国每年大约有5000例不同程度的听力损害与缺氧缺血性脑病有关，而新生儿听力损害与出生时窒息缺氧有关。围生期缺血缺氧性听力损害的部位可能主要在耳蜗、耳蜗核及下丘脑，主要引起听力障碍、智力发育落后等后遗症。围生期窒息缺氧缺血引起耳蜗供氧不足，耳蜗毛细胞功能等明显受损，认知功能障碍。研究者发现：临床上检测到听觉电生理异常时，耳蜗在内的听觉系统已经受损[5]。

分娩疼痛作为一应激源引起一系列内分泌反应，使产妇过度紧张，影响子宫有效收缩，使产程延长，而分娩镇痛可缩短产程，降低胎儿缺氧和新生儿窒息。七氟醚是一种新型吸入全身麻醉剂，它具有芳香气味，可以抑制中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统，不刺激呼吸道，应用于成人、儿童和老年人均安全，尤其在分娩镇痛中有很好的前景。

内耳NO的功能可能是调节细胞内钙离子浓度。钙离子与外毛细胞活动性调节有关，细胞内游离钙离子浓度升高可导致内毛细胞神经递质的释放[6]。另外NO在内耳的血液循环中也起作用。本研究显示，新生大鼠缺氧缺血时，导致NO的分泌增多，使新生大鼠的听觉生理发生紊乱，造成新生大鼠的耳蜗损伤；七氟醚给予缺氧缺血的新生大鼠后，减少NO的分泌，ABR测试显示听性脑千反应阈降低。治疗组与模型组相比听性脑干反应阈降低，表明应用七氟醚对缺氧缺血大鼠进行干预，可以促进其听觉生理的恢复，因此，七氟醚母鼠分娩镇痛对新生鼠缺氧性耳蜗损害具有保护作用。

[1] 韩明训,赵乌兰.针刺及川芎嗪对急性药物性聋豚鼠耳蜗内氧自由基生成影响实验研究[J].浙江中西医结合杂志,2013,22(10): 782-784.

[2] Catheline G,Touquet B,Besson JM,et al.Parturition in the rat:a physiological pain model[J].Anesthesiology,2006,104(6):1257-1265.

[3] 谢利红,唐安洲,尹时华.60cO照射对豚鼠听力及耳蜗螺旋神经节细胞Caspase表达的影响[J].听力学及言语疾病杂志,2012,20(1):32-35.

[4] 王爱梅,汤浩,宝东艳.丹参注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗NOS异构体表达的影响[J].中国应用生理学杂志,2011,27(2): 246-248.

[5] 张海东,王仁生.放射治疗所致活性氧簇对正常组织的损伤及其防治[J].广东医学,2010,31(20):2728-2729.

[6] 金大玉,崔广帅,邢巍巍.电离辐射对耳蜗毛细胞超微结构的影响[J].听力学及言语疾病杂志,2010,18(5):496-497.

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1671-8194（2014）18-0092-02