任绪瑞 刘艳玲 杨美 陈媛媛 王冬良 陈友根

摘 要 利用单因素分析法对影响菰SRAP-PCR扩增效果的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、DNA模板和引物浓度5种因素进行了优化。结果表明：建立了适合菰基因组的SRAP-PCR的体系：1 μL 10×Buffer、0.5 U Taq DNA聚合酶、2 mmol/L MgCl2、50 ng模板DNA、0.20 mmol/L dNTPs、正反向引物的浓度各为0.7 μmol/L，共10 μL。选取5对引物，利用该体系对72份菰样本进行PCR扩增，共获得132条清晰的谱带，其中91条具有多态性，比率为68.9%。菰SRAP-PCR反应体系的优化和建立将为利用该标记进行种质遗传多样性分析和连锁图谱构建等研究提供技术支持。

关键词 菰；SRAP；PCR反应体系；优化

中图分类号 S511.9 文献标识码 A

SRAP（Sequence-related amplified polymorphism，序列相关扩增多态性）是一种不同于RAPD、SSR、AFLP、SNP的分子标记方法，由美国加州大学作物系的Li等[1]于2001年从芸苔属（Brassica L.）植物中研发而来。该标记因具有稳定、简单和易于测序等特性而被广泛应用于植物的品种鉴定[2]、遗传多样性分析[3]、遗传图谱构建[4-5]等研究，其研究对象涉及果树[6]、蔬菜[7-8]和粮食作物[9]等。

菰（Zizania latifolia Turcz.），是稻族（Oryzeae）菰属（Zizania L.）的多年生挺水禾草，具有广泛的利用价值。菰的茎叶是优良的饲料，其嫩茎经过黑粉菌（Ustilago esculenta P. Henn）感染后成为中国重要的水生蔬菜茭白[10]。由于菰和水稻（Oryza sativa L.）亲缘关系较近，且菰具有高产、抗逆性强等优点，是水稻品种改良的重要种质资源[11]。野生菰分布广泛，在许多湿地中是优势种或建群种[12]，对于湖岸带的稳定具有重要的生态功能。虽然野生菰资源具有重要的育种价值和生态功能，目前关于菰野生种群的遗传多样性研究却十分有限，应用的标记有Adh1a序列[13]和SSR标记[14]。SRAP作为一种新型分子标记，虽然在菰品种资源的遗传变异分析中得到初步应用，但其扩增条带产率和多态比率都较低[15]，其反应体系尚需优化。……