冯金 洪愉 黄芬 井申荣 曾韦银

摘要：为研究Profinity eXact系统在蛋白表达及纯化过程中的效果，利用PCR扩增绿色荧光蛋白基因egfp，定向克隆至表达栽体pPAL7上，转化BL21（DE3），荧光显微镜下观察诱导后的重组菌；取超声破碎的上清挂柱纯化，紫外下检测纯化后egfp发出荧光的特性，Western blot分析其免疫反应性。结果表明：诱导后的重组菌pPAL7-egfp/BL21（DE3）在紫外光下能够发出绿色荧光；一步纯化后的egfp蛋白同样也能在紫外激发下发出绿色荧光，同时egfp蛋白能和特异性抗体结合，具有良好的免疫反应性。实验结果说明Profinity eXacl系统对于可溶性蛋白的表达和纯化，方法操作简单、快捷，具有很好的应用价值。

关键词：纯化；Profinity eXact系统；egfp蛋白；原核表达

中图分类号：Q789

文献标识码：A

文章编号：1007-7847（2014）04—0310-05

蛋白纯化作为后基因组学时代研究蛋白质功能、结构最常用的手段，已被国内外研究人员所广泛运用。随着纯化技术的发展，逐渐形成了今天运用最为成熟和普遍的亲和纯化系统，如常用的以GST、Flag、His标签为基础的亲和纯化，即将目的蛋白与纯化标签进行融合表达，通过与标签结合的层析介质来纯化目的蛋白。然而，标签蛋白作为融合蛋白的一部分，其大小、带电荷性可能对目的蛋白的表达、成熟、分泌造成影响，其免疫原性可能对目的蛋白的功能研究带来屏障。因此，对于蛋白质的结构、功能等研究，我们期望纯化出不含标签的目的蛋白，以避免亲和标签可能存在的干扰。然而，如果在亲和纯化后，再对标签进行剪切则使得下游操作更为复杂。……