于萍 刘庆华 杨巧丽 徐磊 张沾

[摘要]目的：以C57BL/6小鼠为动物模型，观察奥斯曼生眉液对毛发生长及生长周期的影响。方法：采用8%硫化钠脱毛法诱导小鼠毛发由休止期进入生长期。脱毛次日，分组涂药，每日涂抹小鼠脱毛区，连续23天，记录小鼠皮肤颜色变化时间及脱毛区毛发生长状况及对毛囊组织学特征和毛囊数目的影响。结果：①与蒸馏水对照组比较，osm01、02样品及阳性对照均可明显缩短C57BL/6小鼠脱毛后皮肤颜色由粉红变黑的时间（P<0.05），osm01样品还可明显缩短皮肤颜色由黑到毛发长出皮表的时间；②小鼠皮肤结构完整,组织无炎症；与蒸馏水对照组比较，osm01和阳性对照组真皮浅层毛囊数明显增加（P<0.05）。结论：奥斯曼生眉液可诱导和延长毛发生长期，推迟毛发退行期，促进C57BL/6小鼠毛发生长。

[关键词]奥斯曼生眉液；C57BL/6小鼠；毛发生长；毛发周期

[中图分类号]R332 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2014）06-0461-04

Study on effects of Osmen Plant Eyebrow Growing liquid on hair growth in C57 BL/6 mice

YU Ping1,LIU Qing-hua1.2,YANG Qiao-li2,XU Lei2,ZHANG Zhan1

(1.Xinjiang Osmen Biological Resources co.,ltd,Urumqi 830026,Xinjiang,China；2.Xinjiang Institute of Marteria Medica)

Abstract:ObjectiveTo observe the effects of Osmen Plant Eyebrow Growing liquid on hair growth and hair cycle of C57BL/6 mouse alopecia mode.MethodsAnagen was induced over the back of telogen mice by epilation of 8% Na2S.The experimental mice were using respectively medication for 23 days,meanwhile the daily changes of skin color and the final hair growth characteristic were observed.Furthermore,the effects of its on hair growth were evaluated by measuring morphology and the number of follicle in mice.Resultsosm01,02 samples and the positive control can significantly shorten the C57BL / 6 mice after depilation turned from pink to black time (P<0.05),osm01 sample can be significantly reduced skin darkening of the skin to grow hair time table.Skin structure intact mice,tissue without inflammation,compared with distilled water control group,osm01 superficial dermis and positive control group significantly increased the number of follicles (P<0.05).ConclusionOsmen Plant Eyebrow Growing 1iquid not only can induce and prolong anagen,but also postpone catagen in C57BL/6 mice.Moreover,it can promote hair growth of experimental mice.

Key words:Osmen Plant Eyebrow Growing liquid;C57BL/6 mice;hair growt;gmwing phase of hair cycle

奥斯曼生眉液，由欧洲菘蓝叶、何首乌根、诃子、侧柏叶和黑种草籽五味中药组成，具生眉、养眉功能，产品一经上市，便以它鲜明的民族性、天然性和功效性立即引起社会各方面的关注，受到消费者的青睐，显示出巨大的市场潜力[1]。但由于产品开发较早，提取工艺落后，存在杂质含量高，产品在高温高湿环境下不稳定等缺点。为提高产品质量，奥斯曼课题组采用国际先进的超滤纳滤技术对生眉液功效成分提取液进行分离纯化、浓缩，降低杂质，提高有效物含量，解决产品稳定性问题，同时提高产品的生眉和养眉效果。本文以药效学数据作为主要评价指标，通过研究考察膜工艺与原工艺生眉液产品对C57BL/6小鼠毛发生长及生长周期的影响，来评价奥斯曼生眉液的功效性。

1实验材料

1.1 仪器：CMl900冰冻切片机；显微镜；解剖显微镜；显微外科器械等。

1.2 试剂与实验动物

1.2.1 试剂：osm01 膜工艺制备的生眉液，批号20130405；osm02原工艺制备的生眉液，批号20111201（均由新疆奥斯曼生物资源有限公司提供，）阳性对照，章光101育发剂（北京章光101科技发展有限公司，市购，批号20120701）；硫化钠、石蜡、甲醛、酒精、二甲苯、伊红染液、苏木精染液（均市购）。

1.2.2 实验动物：近交系C57BL/6小鼠，雌性，6～8周龄，体重15～20g，选择皮肤粉红、毛发处于休止期的小鼠，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。

2实验方法

2.1 小鼠毛发生长周期的影响：将小鼠背部用8%的硫化钠脱毛，去毛面积约4cm2，2min后用湿布擦去，保证局部毛发完全脱掉[2]。脱毛次日，选取脱毛区光滑且无损伤小鼠随机分为蒸馏水对照组、阳性对照组及osm01、02样品组，每组8只。各组均于脱毛局部直接涂抹给药，每天涂抹1次，每次涂0.2ml，连续23天。每天观察小鼠皮肤颜色变化，分别记录每只小鼠脱毛区皮肤颜色从粉红色到开始变黑的时间，皮肤由黑到毛发长出皮肤表面的时间，采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理，用方差分析对组间数据进行分析。

2.2 小鼠皮肤组织学的观察：毛发生长周期皮肤实验结束后，处死小鼠切取各小鼠给药背部相同位置皮肤组织块，10%甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋切片，苏木精-伊红（HE）染色，光镜下观察小鼠皮肤毛囊的组织学变化，观察指标如下：①一般组织学检查：观察皮肤完整性，有无充血、水肿、炎细胞浸润等反应及程度；②显微镜观察，浅层毛囊计数，采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理，用方差分析对组间数据进行分析。

3实验结果

3.1 各组药物对毛发周期的影响：小鼠脱毛后，皮肤呈现粉红色，毛发进入休止期，涂药4～9天后，阳性对照药组和osm01、02组小鼠皮肤开始发黑，8～10 天，蒸馏水对照组开始变黑，统计结果表明，与蒸馏水对照组比较，osm01、02样品及阳性对照均可明显缩短C57BL/6小鼠脱毛后皮肤颜色由粉红变黑的时间（*P<0.05或**P<0.01），osm01样品还可明显缩短皮肤由黑到毛发长出皮表的时间。结果见表1和图1。

3.2 对小鼠皮肤组织学的影响：检查结果表明，小鼠皮肤结构完整，被覆鳞状上皮完整，角化层无增厚，真皮内无血管扩张充血、炎细胞浸润。各组药物对毛囊个数的影响，与蒸馏水对照组比较，osm01和阳性对照组真皮浅层毛囊数明显增加（*P<0.05）。统计结果见表2和见图2～5。

4讨论

4.1实验结果分析：本文通过观察C57BL/6近交系小鼠给药后毛发生长周期的变化以及小鼠毛囊计数结果，反映出给药对C57BL/6近交系小鼠毛发生长周期的影响。实验结果表明，奥斯曼生眉液的活性成分通过膜工艺进行分离纯化后，能明显缩短C57BL/6近交系小鼠毛发生长由休止期进入生长期以及毛发长出皮表的时间，生毛发的效果比原有工艺产品显著提高。对小鼠皮肤组织学的检查结果表明奥斯曼生眉液安全性比较高，对皮肤基本无刺激。然而人与动物存在种属差异，故奥斯曼生眉液的生眉效果和安全性有待进一步临床研究加以证实。

4.2 实验方法的探讨： C57BL/6近交系小鼠是目前用来观察毛发周期及毛发再生的较为普遍的动物模型，因其本身皮肤颜色会随毛发处于不同的生长周期而改变，能非常直观地反映出药物对毛发生长的影响[3-4]。C57BL/6小鼠在6～8周饲养良好状态下，所有毛囊均由生长期进入休止期，而且生理状态下不再自发进入生长期[5]。经过人工脱毛或拔毛等刨伤刺激后可诱导其毛发进入生长期。该小鼠躯干皮肤的黑素细胞只存在于毛囊中，而且仅于生长期时合成黑色素并传递给角质形成细胞，使皮肤变为黑色，至退行期，黑素的生成减少，皮肤呈灰色，至休止期黑素的生成完全停止，使皮肤变为粉红色。因此可通过C57BL/6小鼠皮肤颜色变化周期、组织学指标观察，综合评价药物的功效和安全性[6]。

章光101是国内生发知名品牌，在生毛发行业中市场对其认可度较高[7]。在生毛发实验中，通常将其作为阳性对照组，用来观察实验组的功效。osm01给药组、osm02给药组和阳性对照组与蒸馏水组比较，osm01给药组和阳性对照组都有显著性差异，osm02给药组则无显著性差异；osm01给药组和osm02给药组与阳性对照组比较，则都无显著性差异。本文通过实验证明膜工艺产品osm01生眉液能诱导C57BL/6小鼠毛发生长，缩短从休止期进人生长期的时间，增加毛囊数目。

4.3 奥斯曼生眉液促进眉毛生长的机制探讨：欧洲菘蓝叶[8]、诃子和侧柏叶具有杀菌改善毛囊环境（对皮肤起到凉血消炎、抗菌和止痒的作用）、何首乌根和黑种草籽具有滋养（促进新陈代谢、供给毛发再生长的营养物质）[9]、侧柏叶防脱（给予毛母细胞一定的刺激，促进毛发健康生长）[10]，奥斯曼生眉液精选这五种植物，通过膜工艺分离纯化、浓缩有效成分配制而成。奥斯曼生眉液就是通过这五种植物的上述作用来改善眉部毛囊生理功能和微循环状态，激活毛囊母细胞，促进毛发生长的。

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[3]杨淑霞,马圣清,钟志红,等.C57BL/6小鼠毛发周期动物模型的建立[J].中华皮肤科杂志,1999,32(4): 252-253.

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[9]杨丽娟.从古方看何首乌“乌发、生发”的应用[J].中医药通报，2008，7(3)：39.

[10]陈兴芬,单承英,马世宏,等.侧柏叶化学成分、生理活性及防脱发功能研究进展[J].中国野生植物资源,2010,29(3):3-5.

[收稿日期]2014-01-15[修回日期]2014-03-04

编辑/张惠娟

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