高效液相色谱法测定安神补脑片中淫羊藿苷含量

2014-04-28石继伟

中国药业 2014年1期

刘源，石继伟

（江苏省镇江市药品检验所，江苏镇江 212003）

安神补脑片由淫羊藿、鹿茸、制何首乌、干姜、甘草、大枣组方，具有健脑安神、生精补髓、益气养血等功效。其收载于《国家中成药标准汇编·内科心系分册》，该标准中尚无淫羊藿的质量控制指标。淫羊藿苷作为淫羊藿的活性成分，是本方有效成分之一。为了有效控制安神补脑片的质量，笔者参考相关文献[1－2]，采用反相高效液相色谱法测定该制剂中淫羊藿苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪；AG245型电子天平(瑞士梅特勒公司)；UV－2401PC型紫外分光光度计。淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110737－200415，供含量测定用）；安神补脑片（吉林长春制药有限公司，批号为 100101，090810）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm × 4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈－水（35 ∶65，V／V）；柱温：30 ℃ ；进样量：10 μL；流速：0．7 mL ／min；检测波长：270 nm。

2．2 溶液制备

精密称取淫羊藿苷对照品适量，置100 mL容量瓶中，加入甲醇适量，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，精密吸取2 mL置20 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成10 μg／mL的溶液，作为对照品溶液。取样品装量差异项下供试品，研细，取3片量，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释，超声处理30 min，冷却至室温，再稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液1 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即得供试品溶液。取不含淫羊藿药材的阴性样品，加甲醇制成阴性对照品溶液。

2．3 测定波长选择

精密吸取对照品溶液2．0 mL置20 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在紫外分光光度计下扫描。结果在269．7 nm波长处有最大吸收。最终选择270 nm波长作为高效液相色谱仪检测波长，见图1。

图1 淫羊藿苷紫外吸收光谱图

2．4 方法学考察

专属性试验：取2．2项下3种溶液，按拟订色谱条件测定。结果见图2，表明阴性对照品溶液对测定无干扰。

线性关系考察：称取淫羊藿苷对照品 10．06 mg，置 100 mL容量瓶中，加甲醇适量，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，制成0．100 6 g／L的溶液，作为对照品贮备液，分别精密吸取对照品贮备液 1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10.0 mL，置 20 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定。以峰面积(Y)为纵坐标、淫羊藿苷质量浓度（X，μg／mL）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝29．548 X＋2．354 5，r＝0．999 8。结果淫羊藿苷质量浓度在 5．03 ～50．3 μg／mL 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取对照品贮备液2．0 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，连续进样5次。结果的 RSD为0．11%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在 0，4，8，16，24 h 时进样，测定淫羊藿苷的峰面积。结果的 RSD为1．01%（n＝5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一样品，连续进样6次，在相同测试条件下测定。结果淫羊藿苷平均含量为 10．743 4 μg／mL，RSD 为 0．61%（n＝6），表明该方法重复性较好。

加样回收试验：分别称取已知含量的样品适量，精密加入对照品适量，按2．2项下方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。