罗晓 张丽丽 韩书贤 安志国 伊琦忠

CMYA5基因多态性与新疆维吾尔族精神分裂症的关联性研究☆

罗晓*张丽丽△韩书贤*安志国*伊琦忠*

目的 探讨心肌病相关基因5（cardiomyopathy associated 5，CMYA5）rs3828611位点基因多态性与新疆维吾尔族人群精神分裂症的关联性。方法通过Taq-man探针分型技术，对684例维吾尔族精神分裂症患者及678名维吾尔族正常对照的CMYA5基因rs3828611位点进行基因分型，采用阳性与阴性症状量表（positive and negative symptoms scale，PANSS）评估患者症状。结果患者组与对照组间，rs3828611位点基因型与等位基因频率分布差异均无统计学意义（P＞0.05）；患者组男性与对照组男性、患者组女性与对照组女性间rs3828611位点基因型与等位基因频率分布差异均无统计学意义（P＞0.05）；青少年发病的患者与青少年对照之间，以及成年发病的患者与成年对照间等位基因和基因型频率差异无统计学意义（P＞0.05）。不同基因型患者之间PANSS量表评分差异无统计学意义（P＞0.05）。结论CMYA5基因rs3828611位点多态性与新疆维吾尔族精神分裂症无明显关联。

精神分裂症 心肌病相关基因5rs3828611位点 单核苷酸多态性

大量的临床及基础研究表明，遗传因素在精神分裂症的发病机制中扮演着重要角色[1]。近年来，关联和连锁分析研究也证实，精神分裂症是一种复杂的多基因遗传疾病[2]。Sarparanta[3]发现心肌病相关基因5（cardiomyopathy associated 5，CMYA5）所编码的Dysbindin结合蛋白在精神分裂症的发生发展中具有重大意义。因此推测CMYA5基因多态性可能与精神分裂症发病密切相关。这种推测也不断得到证实，如Chen等[4]在对欧裔高加索人群的全基因组关联研究（genomewide association studies，GWAS）中指出，CMYA5基因rs3828611位点的等位基因和基因型频率分布在精神分裂症组和对照组间有明显的差异；Li等[5]在中国南方汉族人群中发现，rs3828611是精神分裂症发病的保护性因子。既往国内关于rs3828611基因的研究大多集中于汉族人群，尚未见维吾尔族精神分裂症与该基因的研究报告。本研究以新疆维吾尔族人群为研究对象，探讨rs3828611位点多态性与新疆维吾尔族精神分裂症的关联性。

1 对象与方法

1.1 研究对象患者组来自新疆医科大学第一附属医院、新疆伊犁州精神病院、新疆和田地区精神病院、新疆喀什第一人民医院、新疆乌鲁木齐市安宁医院的住院及门诊患者。入组标准：①采用定式临床检查（structured clinical interview for DSM-IV，SCID）进行精神检查，符合《美国精神障碍诊断与统计手册第四版》（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,Fourth Edition，DSM-Ⅳ）精神分裂症诊断标准；②世居新疆维吾尔自治区的维吾尔族，相互间无血缘关系。排除标准：①患神经系统疾病或其他严重躯体疾病者；②有老年痴呆、癫痫或内分泌、血液系统疾病史者；③妊娠期或哺乳期妇女。共收集723例患者的临床资料及血液样本，其中39例因基因型分型不成功而剔除。纳入分析的684例患者中，男性418例，女性266例；年龄13～61岁，平均（37.84± 12.27）岁。首次发病年龄≥18岁定义为成年发病，共566例；首次发病年龄＜18岁定义为青少年发病，共118例。

对照组为新疆医科大学第一附属医院体检中心的健康体检者。入组标准：①无精神疾病病史或家族史；②世居新疆维吾尔自治区的维吾尔族，与患者组及相互间无血缘关系。排除标准与患者组相同。共收集714名对照，其中678名基因型成功分型而纳入分析。男性369名，女性309名；年龄12～74岁，平均（39.09±13.63）岁。入组时年龄≥18岁为成年对照，共635名；年龄＜18岁为青少年对照，共43名。患者组和对照组性别分布具有统计学差异（χ2=6.522，P=0.011），年龄的差异无统计学意义（t=-1.809，P=0.061）。

所有研究对象或其第一监护人均知情同意，并签署知情同意书。本研究通过新疆医科大学第一附属医院伦理委员会的审查。

1.2 研究方法

1.2.1 提取DNA 所有研究对象于晨起后采集空腹肘静脉血5 mL，-20℃分装保存。使用Tiangen DNA试剂盒（DP318）提取外周血DNA，-80℃保存备用。

1.2.2 筛选多态性位点 根据GWAS研究报道及后续一系列的验证报道[4-5,11]，CMYA5基因rs3828611位点与精神分裂症的发生具有一定相关性。因此，根据国际人类基因组单体型图计划（International HapMap Project）数据库，结合临床资料，选取位于CMYA5上的候选单核苷酸多态性位点（single nuecleotide polymorphism，SNP）rs3828611进行研究。

1.2.3 基因分型 采用Taq-man探针分型技术对所有研究对象的DNA进行基因分型，由美国应用生物系统公司（Applied Biosystems,Inc.）提供基因分型探针及Taq-man Universal PCR MasterMix。PCR反应在GeneAmp PCR 9700系统中进行。反应体系共5μL，含3 ng DNA、2.5μL Taq-man Universal PCR MasterMix和0.035μL Taq-man探针。PCR反应条件：94℃预变性15min；94℃变性20 s，60℃退火1min；55个循环；72℃延伸7min；4℃保存。PCR反应产物利用美国应用生物系统公司（Applied Biosystems,Inc.）7900 DNA检测系统进行基因型分型。所有样本中，有94.6%（684例）患者及95%（678名）对照的基因型被成功确定。

1.3 统计学方法借助SHEsis软件平台，采用χ2检验进行患者组与对照组的Hardy-Weinberg遗传平衡度检验，以及两组间等位基因和基因型频率的比较；分别按性别和发病年龄（对照组按入组时年龄）分亚组，比较患者和对照等位基因和基因型频率。在SPSS 17.0中，釆用单因素方差分析比较rs3828611位点不同基因型患者的PANSS评分。检验水准α为0.05。

2 结果

2.1 Hardy-W einberg平衡检验患者组（χ2= 0.269，P=0.604）和对照组（χ2=0.693，P=0.405）rs3828611位点分布符合遗传平衡定律，提示该样本具有一定的代表性。

2.2 rs3828611位点等位基因与基因型频率两组rs3828611位点等位基因与基因型的分布见表1。患者组与对照组间等位基因的分布差异无统计学意义（χ2=0.271，P=0.603），基因型的分布亦无统计学差异（χ2=0.317，P=0.853）。见表1。

2.3 各性别亚组rs3828611位点等位基因与基因型频率患者组中，男性与女性等位基因（χ2= 0.063，P=0.801）与基因型（χ2=4.083，P=0.130）频率分布无统计学差异。患者组男性与对照组男性、患者组女性与对照组女性等位基因与基因型频率均无统计学差异（P＞0.05）。见表2。

2.4 各年龄亚组rs3828611位点等位基因与基因型频率青少年发病患者与青少年对照、成年发病患者与成年对照间进行等位基因与基因型频率的比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

2.5 不同基因型患者的PANSS量表评分在684例成功分型的患者中，有34例未能收取PANSS量表。PANSS量表齐全的患者中，C/C型基因型362例，C/G型基因型258例，G/G型基因型30例。不同基因型患者之间PANSS各因子分和总分的差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

3 讨论

表1 患者组与对照组等位基因及基因型频率分布

表2 不同性别rs3828611位点等位基因与基因型频率分布

表3 青少年和成年患者组与对照组等位基因及基因型频率分布

近几年的GWAS研究除在第6号染色体广泛的区域及转录因子4（transcription factor 4，TCF4）[6]、8号染色体神经调节素-1（neuregulin,NRG1）区域[1]发现与精神分裂症发病密切相关的风险基因外，并没有发现能够达到全基因组水平的其他候选基因[6-7]。Chen等[4]提出“候选基因筛查和验证两步走”的方法寻找与精神分裂症相关的基因，该研究发现在CMYA5基因内有3个SNPs与精神分裂症有关，其中包括rs3828611位点。Li等[5]也试图寻找这种关联性，该研究收集5605例汉族精神分裂症患者的样本，进一步验证rs3868211与精神分裂症的发病有关联。Wang等[8]检测CMYA5上其他位点，发现rs7714250及rs13158477与精神分裂症的关联有统计学意义，再次证明CMYA5可能与精神分裂症相关。然而相反的是，日本的病例对照研究并未发现CMYA5上有任何与精神分裂症有关的SNP[9]。这种不一致的结论可能与研究人群有关。本次研究选择新疆维吾尔族人群为研究对象，对既往研究中广泛报道的位点rs3828611进行基因分型，结果提示CMYA5基因上的rs3828611位点多态性与维吾尔族精神分裂症无关。CMYA5基因位于5q12-q13，共有13个外显子，编码蛋白为Myospryn，该蛋白可以和多种亚基相互作用，如Dysbindin、蛋白激酶A的调节亚基等。Dysbindin基因是精神分裂症相关性研究的热点基因之一；Myospryn与PKA调节亚基的相互作用提示其可能通过cAMP信号转导通路影响疾病的发生，cAMP信号转导通路在精神分裂症患者中有不同程度的改变[10]。目前对于cAMP信号转导通路与精神分裂症发病的关联性研究也有待进一步地开展。另外，因为CMYA5属于三结构域蛋白（tripartite motif，TRIM）蛋白家族，该蛋白家族的TRIM32基因既和肌病有关，该基因异常又能引起精神症状，增加精神分裂症发病的风险[11]。提示CMYA5基因与精神分裂症的发病密切相关。

表4 不同基因型患者PANSS评分（±s）

表4 不同基因型患者PANSS评分（±s）

基因型C/C C/G G/Gn362 258 30阳性量表分17.3±6.61 17.7±7.11 19.4±7.43阴性量表分23.0±7.99 23.3±7.44 23.3±8.09一般精神病理症状分40.8±10.3 41.6±11.3 40.1±10.4 PANSS总分81.3±19.9 82.9±21.1 82.0±21.1

但是，本研究并未发现维吾尔族精神分裂症患者CMAY5基因rs3828611位点等位基因和基因型频率与对照有差异。同时，进一步分亚组分析的结果表明，rs3828611的等位基因及基因型频率在男性及女性维吾尔族精神分裂症患者的差异无统计学意义，青少年发病患者与青少年对照、成年发表患者与成年对照间等位基因与基因型频率的差异亦无统计学意义。在患者组中，C/C、C/G、G/G基因型患者的阳性量表分、阴性量表分、一般精神病理症状分及PANSS总分差异无统计学意义，并未发现rs3828611与新疆维吾尔族精神分裂症临床症状严重程度的相关性。

本研究致力于寻找中国新疆维吾尔族人群中精神分裂症患者CMYA5基因多态性与疾病的相关性，未发现患者组和对照组的差异。结果与既往研究不一致的原因可能是：①精神分裂症具有高度遗传异质性——rs3828611在亚洲人群中最小等位基因频率（minor allele frequency，MAF）为41%，而在欧洲人群中MAF仅为7%（数据来源于http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/），提示种族差异在疾病的发生发展中可能具有重要作用；②所选位点单一——Chen等[4]提出通过“候选基因筛选和验证两步走”的方法来寻找与精神分裂症发病相关的基因，且纳入较大样本，对大量位于CMYA5上的SNPs进行关联性及单倍体分析，而本研究只选取广泛热议的单一SNP，具有一定的局限性；③样本量不足——本研究在新疆少数民族人群中进行验证分析，新疆地广人稀，样本量的不足可能影响统计效力，同时，这也是全基因组关联分析正在面对的关键性问题。不足之处需要在将来的研究中进一步改进，以期能找到导致精神分裂症发病的明确基因，为精神分裂症基因研究的发展提供理论依据。

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The association between the Uygur patients with schizophrenia and CMYA5 polymorphism.

LUO Xiao, ZHANG Lili,HAN Shuxian,AN Zhiguo,YI Qizhong.
The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi 830000,China.Tel:0991-4363965.

ObjectiveTo investigate the association between Cardiomyopathy associated 5(CMYA5)polymorphisms and schizophrenia in the Uygur Chinese population.MethodsTaq-man assay was used to detectCMYA5gene rs3828611 in 684 schizophrenia patients and 678 healthy controls from Chinese population.The positive and negative symptoms scale(PANSS)was used to evaluate patients’symptoms.ResultsNeither the genotype nor the allele frequencies of rs3828611 was significantly differentbetween the patients and the controls(P＞0.05).The differenceswere notsignificant in either each gender subgroup or in each age(teenager and adult)subgroup(P＞0.05).The total score and the sub scores of PANSS were not significantly different among patientswith different genotype groups(P＞0.05）.ConclusionsThere is no association betweenCMYA5rs3828611 and schizophrenia in the Uygur Chinese population.

Schizophrenia Cardiomyopathy Associated 5(CMYA5)rs3828611Single Nucleotide Polymorphism

R749.3

A

2014-07-25）

（责任编辑：肖雅妮）

10.3936/j.issn.1002-0152.2014.12.005

☆国家自然科学基金（编号：81360209）；“973”计划子课题（编号：2007CB512301）；“863”计划子课题（编号：2006AA02A-407）；新疆维吾尔自治区自然科学基金（编号：2010211A51）

*新疆医科大学第一附属医院（乌鲁木齐 830000）

△河北省第六人民医院