孙敏华，董嘉文，李林林，袁建丰，邝瑞欢，胡奇林，张建峰

（广东省农业科学院动物卫生研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室，广州 510640）

研究论文

鹅细小病毒NS1蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

孙敏华，董嘉文，李林林，袁建丰，邝瑞欢，胡奇林，张建峰

（广东省农业科学院动物卫生研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室，广州 510640）

本研究克隆了鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）佛山株（Foshan-2009）的NS1基因，并将其克隆至原核表达载体pET32a（+），构建重组质粒pET32a-NS1。经转化，IPTG诱导表达及SDS-PAGE和Western blot分析表明，NS1蛋白得到了表达，并且能与抗GPV的番鸭血清发生特异性反应。通过棋盘法确定NS1蛋白包被量为0.5 μg/孔，待检血清1:50稀释，HRP标记的兔抗鸭二抗1:10 000倍稀释时ELISA反应条件最佳，并确定阴阳性临界值为0.399。该ELISA方法特异性强，与番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清均无交叉反应；重复性好，批内和批间重复试验的变异系数分别小于5%和10%；检出率高，GPV阳性番鸭血清的检出率为92%。本研究所建立的间接ELISA方法为鹅细小病毒的血清学诊断和流行病学监测奠定了基础。

鹅细小病毒；NS1 蛋白；ELISA

鹅细小病毒病或称小鹅瘟，是由鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）引起的雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性败血性传染病[1]。该病于1956年由方定一教授首次在江苏省扬州市发现。GPV主要侵害3～20日龄的雏鹅和雏番鸭，传播快，发病率和死亡率较高，特征表现为水样腹泻，渗出性肠炎，甚至腊肠样栓塞[2]。

GPV基因组长约5.1 kb，可编码5种蛋白，包括2种非结构蛋白（NS1和NS2）和3种结构蛋白（VP1、VP2和VP3）。……