李树清，李雯雯，张鸿满，陈韶红，李 健，陈志飞，王巧全，张永年，黄维义

（1. 上海出入境检验检疫局，上海 200135；2. 中山大学附属第一医院动物实验中心，广州 510080；3. 广西疾病预防控制中心，南宁 530021； 4. 中国疫病预防控制中心寄生虫病预防控制所，上海 200025；5. 广西大学动物科学技术学院，南宁 530005）

多重PCR鉴定三种颚口线虫方法的建立

李树清1，李雯雯2，张鸿满3，陈韶红4，李 健5，陈志飞1，王巧全1，张永年4，黄维义5

（1. 上海出入境检验检疫局，上海 200135；2. 中山大学附属第一医院动物实验中心，广州 510080；3. 广西疾病预防控制中心，南宁 530021； 4. 中国疫病预防控制中心寄生虫病预防控制所，上海 200025；5. 广西大学动物科学技术学院，南宁 530005）

为了建立快速、灵敏、可靠的鉴别颚口线虫虫种的方法，根据GenBank中发表的棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫ITS-2序列，设计了3对特异引物，建立了这3种颚口线虫的单一PCR和多重PCR检测方法，并分别对单一PCR和多重PCR方法的特异性和敏感性进行了鉴定。结果显示单一PCR和多重PCR均能特异扩增出棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫，其片段大小分别为282、358、183 bp，单一PCR对棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫体DNA最小检出量分别为0.2、0.01、0.01 ng/μL。对宫脂线虫、异尖线虫、棘口吸虫以及迭宫绦虫均不能进行扩增。用建立的多重PCR方法对菲律宾、印度尼西亚、黑龙江颚口线虫等12条颚口线虫DNA模板进行扩增，经鉴定菲律宾与印度尼西亚的颚口线虫为棘颚口线虫，黑龙江的颚口线虫为日本颚口线虫。鉴定结果与原虫体样本的形态鉴定和测序分析结果一致。……