汪秀会，宫晓倩，刘晓敏，阮宝阳，李泽君，周艳君，童光志，于 海

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

古典H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的建立

汪秀会，宫晓倩，刘晓敏，阮宝阳，李泽君，周艳君，童光志，于 海

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

利用RT-PCR技术扩增古典H1N1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/1/2011株的8个目的基因片段，分别克隆至双向转录表达载体pBD上。将8个重组质粒纯化后共转染293T细胞，48 h后收集上清，接种MDCK细胞。当细胞出现明显病变时，收集MDCK细胞上清，其血凝效价为1:64，与原始野生株血凝效价一致；提取拯救病毒的RNA并进行8个目的片段扩增及序列分析，测序结果显示与野生株病毒相同，表明病毒拯救成功。古典H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的成功建立，不仅为探索流感病毒致病机理、感染机制及功能研究奠定了基础，同时也为H1N1亚型猪流感病毒新型疫苗的研制开辟了新的途径。

RT-PCR；H1N1亚型；猪流感病毒；反向遗传；病毒拯救

猪流感（swine influenza，SI）是由正黏病毒科、A型流感病毒属的猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。临床症状主要表现为咳嗽、流涕、喷嚏、高烧、昏睡、呼吸困难和食欲下降等[1]。大多在早春、深秋或者温度骤变的情况下发生，特点为传播速度快、发病率高，对仔猪特别是免疫力较差的仔猪致死率较高。同时，SIV还可以引起母猪的生殖障碍，育肥猪体重增长缓慢甚至减轻，对养猪业造成了重大的经济损失。

SIV为单股负链RNA病毒， 可划分为A、B、C三型，A型流感病毒又可划分为不同的亚型，目前世界上普遍流行的亚型主要有H1N1、H1N2和H3N2三种亚型[2-4]。……