王晓娟，米荣升，周 鹏，黄 燕，王向佩，杨晓娇，石 凯，刘宇轩，雷晓思，陈兆国，赵 权

（1. 吉林农业大学动物科学技术学院，长春 130118；2. 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室 中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241）

四种隐孢子虫半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因的克隆和序列分析

王晓娟1,2，米荣升2，周 鹏2，黄 燕2，王向佩1,2，杨晓娇2，石 凯2，刘宇轩2，雷晓思2，陈兆国2，赵 权1

（1. 吉林农业大学动物科学技术学院，长春 130118；2. 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室 中国农业科学院动物源性食品安全研究中心，上海 200241）

为克隆不同种隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）的半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因，分析其核苷酸与编码氨基酸序列的变异情况，根据GenBank上公布的微小隐孢子虫（C. parvum）Cryptopain-1基因序列设计合成引物，用PCR技术从不同种隐孢子虫基因组DNA中扩增Cryptopain-1基因，并将其克隆至pZeroBack/blunt载体，阳性克隆经PCR鉴定正确后测序，与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因进行序列同源性比对，并进行系统进化分析。结果显示，本研究成功从泰泽隐孢子虫（C. tyzzeri）、火鸡隐孢子虫（C. meleagridis）、兔隐孢子虫（C. cuniculus）基因组DNA中扩增出Cryptopain-1基因。与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因比较，泰泽隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、兔隐孢子虫Cryptopain-1基因核苷酸序列相似性分别为98.67%、94.53%、98.34%，演绎的氨基酸序列相似性分别为99.00%、96.51%、99.00%。研究结果为利用Cryptopain-1基因进行隐孢子虫的代谢、致病机理等研究奠定了基础。

隐孢子虫；Cryptopain-1基因；克隆；序列分析

隐孢子虫（Cryptosporidiumspp.）是一种细胞内寄生原虫，它能够感染多种动物和人，引起以腹泻为主要症状的隐孢子虫病（cryptosporidiosis）[1]。……