利湿口服液的抗皮炎及湿疹作用研究

2014-04-11付文焕钟明康

中成药 2014年1期

关键词：西替利嗪朗格豚鼠

朱倩，付文焕，王斌，钟明康

（复旦大学附属华山医院药剂科，上海 200040）

利湿口服液的抗皮炎及湿疹作用研究

朱倩，付文焕，王斌，钟明康

（复旦大学附属华山医院药剂科，上海 200040）

目的考察利湿口服液（苦参、金银花、陈皮、茯苓皮、车前子、地肤子）的主要药效作用。方法通过对豚鼠磷酸组胺致痒阈的测定、 2，4-二硝基氯苯（DNCB）诱发豚鼠过敏性接触性皮炎模型及接触性湿疹豚鼠模型的试验，观察利湿口服液高、中、低剂量与中药对照药肤痒颗粒和西药对照药二盐酸西替利嗪片的药效。结果利湿口服液高、中剂量能显著提高磷酸组胺致痒阈（P＜0.01），对 DNCB诱发豚鼠过敏性接触性皮炎有显著的抑制作用（P＜0.05、 P＜0.01），对豚鼠慢性接触性湿疹有显著的防治作用（P＜0.01），利湿口服液高剂量减少表皮朗格汉斯细胞和炎性细胞的作用与肤痒颗粒比较有显著差异（P＜0.05， P＜0.01）。结论利湿口服液具有止痒、防治接触性湿疹、接触性皮炎的作用。

利湿口服液；药效学；湿疹；皮炎

利湿口服液（批准文号为 SYZ-ZF-056-2004）为我院中药自制制剂，是我院皮肤科专家根据中医辩证论治、临床经验用药组方而成。本方由苦参、金银花、陈皮、茯苓皮、车前子、地肤子六味中药组成。具有清热利湿、消肿止痒的功效。主治皮炎、湿疹、瘙痒症等。该制剂临床使用已超过20年，疗效显著，副作用小。本研究参考《中药新药研究指南（药理学）》中的中药药效学研究实验，根据其主治功能，对其进行抗皮炎、湿疹及瘙痒症的药效学研究，为临床用药提供理论依据。

1 材料

1.1 药物利湿口服液（3 g生药/mL，本院制剂室提供，批号为 050108）；肤痒颗粒（6 g/袋，四川迪康科技药业股份有限公司成都迪康制药公司产品，批号为041205）；二盐酸西替利嗪片［（仙特明）， 10 mg/片，比利时联合化工企业集团医药部（瑞士），批号为 03630A］。

1.2 试剂磷酸组胺（中国科学院上海生物化学研究所产品，批号为 961114）； 2，4-二硝基氯苯（DNCB）（上海试剂一厂，批号为 890901）；硫化钠（AR.海南汇县宣治化工厂，批号为 020322）；丙酮（AR.上海振兴化工一厂产品，批号：0210511）； Wachstein-Meisel镁激活酶法染色作用液［三磷酸腺苷二钠盐 10 mg，0.2 mol/L Tris缓冲液（ pH 7.2） 10 mL， 2% 硝酸铅 1.5 mL和1.2%无水硫酸镁2.5 mL，加双蒸水至 25 mL］。

1.3 动物白色豚鼠，体质量 250 ～300 g，购于上海松江实验动物场，动物许可证号为 SCXK（沪） 2002-0012。

2 方法

2.1 对磷酸组胺致豚鼠足瘙痒阈的影响［1-3］取白色豚鼠72 只，分 3 批进行，间隔 6 d 和 9 d，每批用鼠24只，雌雄各半。按体质量随机分为 6组：空白对照组（生理盐水）；中药阳性对照组（肤痒颗粒， 3.5 g/kg）；西药阳性对照组（二盐酸西替利嗪片， 2 g/kg）；利湿口服液高剂量组（9 g生药/kg）、中剂量组（4.5 g生药/kg）、低剂量组（2.25 g生药/kg）。按上述各组给药，每日 1 次，灌胃容积均为每 100 g体质量 1 m L，连续给药10 d。于第 10 天给药后 30 min，在豚鼠右后肢足背擦伤处，依次按表1的剂量滴加磷酸组胺，每只0.05 mL，直至出现豚鼠舔右后足时所给予的磷酸组胺总量为致痒阈，记录此总量。

表1 磷酸组胺致痒浓度与致痒总量Tab.1 Concentration of histam ine diPhosPhat-induced tickle and the total of histam ine diPhosPhat

2.2 抗过敏性接触性皮炎试验［4-5］取白色豚鼠72 只，在豚鼠背部脱毛区涂抹 1% 的 2，4-二硝基氯苯（DNCB），每只0.2 mL，隔日重复致敏一次。致敏第 14 天，脱毛区仔细剃毛后，再涂以 0.1%的 DNCB 200 μL进行激发，可见豚鼠背部涂药部位皮肤出现红肿，类似皮炎症状。致敏后1周，分两批进行实验，每批 36 只。按体质量随机分为 6组：空白对照组（生理盐水）；中药阳性对照组（肤痒颗粒， 2.8 g/kg）；西药阳性对照组（二盐酸西替利嗪片， 1.56 g/kg）；利湿口服液高剂量组（7.2 g生药/kg）、中剂量组（3.6 g生药/kg）、低剂量组（1.8 g生药/kg）。按上述分组灌胃给药，每日一次，连续给药 14 d。灌胃容积均为每 100 g体质量1 mL。在末次给药后2 h脱臼处死豚鼠，用内径16 mm的打孔器取下同一部位的皮损皮肤，用游标卡尺测量皮肤厚度，同时称取皮片质量。

2.3 对接触性湿疹模型的防治作用［6-8］取白色豚鼠 72 只，分为两批，每批36 只。在豚鼠背部脱毛区涂抹5%的 DNCB 25 μL致敏，第 3 日重复致敏一次。致敏 2 周后，在豚鼠右耳内侧涂抹 0.1%的DNCB 100 μL进行激发，每周 1 次，连续激发 4周。第3次激发当日，按体质量随机分为6组：空盲法对 1 个400 倍视野内朗格汉斯细胞进行记数。

2.4 统计学方法试验结果皆采用 Statview软件分析，结果用（）表示，对有关数据用方差分析、 LSD法检验，显著性水平取0.05。

3 结果

3.1 对磷酸组胺致豚鼠足瘙痒阈的影响与空白对照组比较，阳性对照组及利湿口服液高、中剂量组对提高磷酸组胺致痒阈的作用非常显著（P＜0.01）；与剂量有一定的量效关系。肤痒颗粒的止痒效果相当于利湿口服液的中剂量组。结果见表2。白对照组（生理盐水）；中药阳性对照组（肤痒颗粒， 2.52 g/kg）；西药阳性对照组（二盐酸西替利嗪片， 1.4 g/kg）；利湿口服液高剂量组（6.6 g生药/kg）、中剂量组（3.3 g生药/kg）、低剂量组（1.65 g生药/kg）给药。连续给药 24 d 后脱臼处死豚鼠，取下右耳，用直径6 mm打孔器在相同部位取下1耳片，称定质量，用千分卡尺单盲法测定耳片厚度；每耳片测厚度后，拔尽毛发，进行组织脱水、包埋、切片，用 Wachstein-Meisel镁激活酶法对朗格汉斯细胞染色。于显微镜下观察，单盲法对 1 个400 倍视野内朗格汉斯细胞进行记数；另取右耳组织1 块（相同部位），石蜡包埋，切片，苏木精-伊红染色，光镜下逐一观察组织学改变，单

表2 利湿口服液对磷酸组胺致痒阈的影响（）Tab.2 Effect of Lishi Oral Liquid on histam ine diPhos-Phate-induced threshold of tick le（）

注：与空白对照组比，*P＜0.05，**P＜0.01；与利湿口服液高剂量组比，ΔΔP＜0.01

组别剂量动物/只致痒阈/μg空白对照组 11 132.3 ±71.1肤痒颗粒组 3.5 g/kg 11 404.1 ±281.5**二盐酸西替利嗪片组 2 mg/kg 11 545.9 ±283.1**利湿口服液高剂量组 9.0 g/kg 12 562.9 ±266.3**利湿口服液中剂量组 4.5 g/kg 10 403.0 ±188.6**利湿口服液低剂量组 2.25 g/kg 12 227.1 ±120.1ΔΔ

3.2 对抗过敏性接触性皮炎模型的影响与空白对照组比较，高、中剂量组与两个阳性对照组皮肤厚度和皮肤质量相差均有非常显著差异（P＜0.01， P＜0.05），对 DNCB诱发豚鼠过敏性接触性皮炎有一定的防治作用。结果见表3。

3.3 对接触性湿疹模型的影响由表 4 可见，与空白对照组比较，阳性对照组及利湿口服液各剂量组对接触性湿疹模型的耳肿胀度和耳片质量均有显著性差异（P＜0.01， P＜0.05）；高、中剂量组与低剂量比较有显著差异（P＜0.01）。由表 5 和图 1可见，与空白对照组比较，利湿口服液三个剂量组均能显著减少表皮朗格汉斯细胞数（P＜0.01， P＜ 0.05），且对其形态亦有影响；高剂量组减少朗格汉斯细胞数的作用显著大于肤痒颗粒组（P＜0.01）。

表3 利湿口服液对过敏性接触性皮炎的影响（）Tab.3 Effect of Lishi Oral Liquid on contact eczema in guinea Pigs（）

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与利湿口服液高剂量组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

组别剂量动物数/只皮肤厚度/mm 皮肤质量/mg空白对照组 11 2.51 ±0.36 472.19 ±30.35肤痒颗粒组 2.8 g/kg 11 1.75 ±0.22** 375.92 ±76.86**二盐酸西替利嗪片组 1.56 mg/kg 11 1.91 ±0.18** 387.56 ±43.29**利湿口服液高剂量组 7.2 g/kg 12 1.74 ±0.23** 383.56 ±50.98**利湿口服液中剂量组 3.6 g/kg 10 2.00 ±0.12** 433.12 ±40.45*Δ利湿口服液低剂量组 1.8 g/kg 10 2.44 ±0.29ΔΔ 453.80 ±42.50ΔΔ

表4 利湿口服液对湿疹模型耳片厚度和质量的影响（）Tab.4 Effect of Lishi Oral Liquid on the weight and thickness of themodel of contact eczema （）

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与利湿口服液高剂量组比较，ΔΔP＜0.01

组别剂量动物数/只耳片厚度/mm 耳片质量/mg空白对照组 12 1.55 ±0.13 50.88 ±6.40肤痒颗粒组 2.52 g/kg 11 1.13 ±0.11** 36.85 ±6.44**二盐酸西替利嗪片组 1.4mg/kg 12 1.14 ±0.13** 37.20 ±6.69**利湿口服液高剂量组 6.6 g/kg 12 1.11 ±0.11** 36.78 ±5.07**利湿口服液中剂量组 3.3 g/kg 11 1.18 ±0.14** 39.06 ±5.59**利湿口服液低剂量组 1.65 g/kg 11 1.40 ±0.10**ΔΔ 45.40 ±4.83*ΔΔ

表5 利湿口服液对接触性湿疹模型表皮中朗格汉斯细胞计数及形态的影响（）Tab.5 Effect of Lishi Oral Liquid on the count and morPhology of the Langerhans cells in themodel of contact eczema （）

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与利湿口服液高剂量组比较，ΔΔP＜0.01

组别剂量动物数/只朗格汉斯细胞计数朗格汉斯细胞形态空白对照组 10 81.20 ±14.71 多层，有树突分枝肤痒颗粒组 2.52 g/kg 10 64.60 ±17.02**ΔΔ二盐酸西替利嗪片组 1.4 mg/kg 10 36.00 ±8.76** 单层，较少利湿口服液高剂量组 6.6g/kg 10 37.10 ±11.10** 单层，较少利湿口服液中剂量组 3.3 g/kg 11 62.09 ±9.48**ΔΔ利湿口服液低剂量组 1.65 g/kg 11 69.09 ±10.20*Δ

图1 利湿口服液对接触性湿疹模型表皮中朗格汉斯细胞的影响Fig.1 Effect of Lishi O ral Liquid on the Langerhans cells’ moPhology in themodel of contact eczema

由表6与图2可见，与空白对照组比较，阳性对照组及利湿口服液组能显著减少炎性细胞数量，抑制炎性反应；且高剂量组抑制炎症强度大于肤痒颗粒组（P＜0.05）。

表6 利湿口服液对接触性湿疹模型炎性细胞计数的影响（）Tab.6 Effect of Lishi Oral Liquid on the count of the inflamm atory cells in the model of con tact eczem a（）

注：与空白对照组比较，**P＜0.01；与利湿口服液高剂量组比较，ΔΔP＜0.05

组别剂量动物数/只炎性细胞计数空白对照组 10 358.20 ±68.82肤痒颗粒组 2.52 g/kg 10 272.00 ±48.55**Δ二盐酸西替利嗪片组 1.4 mg/kg 10 186.50 ±68.88**利湿口服液高剂量组 6.6 g/kg 10 213.50 ±54.21**利湿口服液中剂量组 3.3 g/kg 11 235.00 ±58.14**利湿口服液低剂量组 1.65 g/kg 11 271.09 ±59.20**ΔΔ

4 讨论

本实验结果表明，利湿口服液具有显著的止痒、防治接触性湿疹和接触性皮炎的作用，可用于主治皮炎、湿疹、瘙痒症等。

图2 利湿口服液对接触性湿疹模型炎性细胞的影响Fig.2 E ffect of LishiO ral L iquid on the inflammatory cells’ moPhology in themodelof contact eczema

本实验中，二盐酸西替利嗪片和肤痒颗粒应用于临床治疗湿疹和皮炎，疗效良好，抗炎作用强，故分别作为西药和中药阳性对照药物。各试验中，以利湿口服液、肤痒颗粒和二盐酸西替利嗪片三药的临床一日使用总量，按体表面积折算人和动物的等效剂量。药效实验时，利湿口服液高剂量组、肤痒颗粒组和二盐酸西替利嗪片组均使用 2.5 倍的等效剂量。利湿口服液中、低剂量组均取前一剂量的1/2。试验给药期间皆记录受试动物体质量，且随体质量变化增加给药剂量。

本制剂处方中，苦参、金银花为君药［9］。其中，苦参具有清热燥湿的功效，其有效成分苦参碱和氧化苦参碱具有抗炎作用，可降低过敏介质的释放，具免疫抑制作用［10-11］。金银花具有解毒、抗炎的作用，其主要成分绿原酸具有调节机体免疫功能、促进白细胞吞噬功能［12-13］。陈皮具有燥湿化痰的功效，主要成分橙皮苷具有抗炎止痛的功能［14-15］。本制剂组方简单，工艺方便，疗效确切，具有良好的开发和应用前景，有望由医院制剂申请为中药新药。

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