李小军，闫文朝，钱伟锋，王天奇，韩利方，袁 林，黄腾飞

肉孢子虫病(Sarcocystosis)是一种食源性人兽共患寄生虫病，能感染人和猪、牛等多种动物，呈世界性分布[1-2]。目前能感染猪的至少有2种肉孢子虫，为米氏肉孢子虫(Sarcocystismiescheriana)和猪人肉孢子虫(S.suihominis)，其中米氏肉孢子虫对猪具有明显的致病性[3-7]，猪人肉孢子虫对人表现一定的致病性[4]。有文献报道[1,8]，志愿者食入生猪肉后，除了表现呕吐、腹泻等肠型肉孢子虫感染症状外，还出现肌肉疼痛和心肌炎等肌肉型肉孢子虫感染症状。猪肉中是否含有能感染人肌肉的肉孢子虫呢？需要进一步证实。因此，弄清猪源肉孢子虫病原种类、感染性和致病性等病原学特性，具有重要的兽医公共卫生意义。

猪肉是国人最主要的肉食品之一。据河南省畜牧局统计，截至2011年全省生猪存栏量已达3 500万头左右,生猪已成为我省畜牧业的支柱畜种[9]。为了摸清近年来猪肉孢子虫病的流行情况，评估猪源肉孢子虫的公共卫生风险，课题组从2011年1-12月，对豫北某大型屠宰场屠宰生猪肉孢子虫感染情况进行了调查和分析。

1 材料与方法

1.1采样 豫北某大型屠宰场屠宰的生猪，宰前2 h，严格按照生猪屠宰检疫规程的要求，对生猪实施临床检查，经临床检查健康的，准予屠宰。宰后在屠宰生产线上，每头猪胴体劈半前，采取两横膈肌脚的新鲜肉样，每块不少于30 g，与胴体编号对应放于带编号的托盘内，每盘10头猪的肉样，及时送寄生虫检疫室进行检查。

1.2肉眼筛查 先剥离每份新鲜肉样上附着的脂肪组织、结缔组织，撕去肌膜，在日光灯下肉眼仔细观察，是否有肉孢子虫包囊存在，然后用显微镜观察给予确认[10]，注意与囊虫、旋毛虫包囊相区别。成熟的猪囊虫：大小约为(6～10) mm×5 mm，肉眼可见如黄豆粒大小的包囊，位于肌纤维之间，呈椭圆形半透明，囊内充满液体，壁上有一个圆形米粒大的乳白色内翻头节；旋毛虫包囊：肉眼下，在肌肉表面可看到稍凸出的针尖大小、黄白色或灰白色小点。显微镜下，旋毛虫包囊位于肌纤维之间的棱形腔内，包囊内的幼虫呈螺旋状卷曲；肉孢子虫包囊：肉眼可见在肉样中呈白色毛根状，压片镜检呈灰白色柳叶形，有时呈椭圆形、梭形、半月形或不规则形[10-13]。

1.3肉样压片镜检 在每块膈肌脚上，顺肌纤维方向随机剪米粒大小的肉样12粒，每头猪24粒，置于载玻片上，滴加适量20%甘油水溶液透明，盖上一张载玻片压片，将两片玻片用力挤压，至肉样半透明状，以透过肉样可见报纸上的字为准，用自制橡皮圈固定。在4×10倍光学显微镜下进行检查。

在任何一块被检肉样上发现肉孢子虫包囊，即判为阳性；对未发现虫体包囊的则判为阴性。 观察标本上的肉孢子虫包囊形态、显微测量其大小，并统计检出率和感染强度。参考猪肉旋毛虫检疫标准[12]，以24粒肉样为单位，计算肉孢子虫感染强度。检出包囊3个以下的，定为轻度感染；4个到7个的定为中度感染；8个以上的定为重度感染。

1.4病理组织学观察 为了进一步确定猪源肉孢子虫包囊的结构、寄生部位及其引起肌肉的病理变化，对压片镜检肉孢子虫阳性的猪，采集其腰肌、肋间肌、颈背侧肌、股内侧肌和膈肌等肌肉样品，固定于10%的福尔马林溶液内。然后通过水洗、逐级脱水、透明、浸蜡、组织包埋、切片和HE染色等组织切片技术对样品进行处理，最后在显微镜下观察包囊在猪肉中寄生情况和引起的病理组织学变化[7]。

2 结 果

2.1屠宰生猪肉孢子虫感染情况 本次共调查屠宰生猪1 016 220头，生猪主要来源于豫北地区，少量来自豫西、与河南交界的山西部分县区。通过对膈肌的肉眼检查和压片镜检，肉孢子虫平均阳性检出率为2.38 ‰，其中3-7月份肉孢子虫检出率为3.07‰～5.29‰,明显高于2011年其它月份；9-12月份检出率为0.17‰～0.46‰，远低于其他月份(表1)。

24粒肉样压片镜检发现，69.61%的阳性猪属于轻度感染，28.16%的阳性猪属于中度感染，仅有2.23%阳性猪为重度感染。说明来自豫北、豫西地区及与河南交界的山西部分地区的生猪肉孢子虫轻度和中度感染非常普遍。

表1不同月份屠宰生猪肉孢子虫感染情况统计表

Tab.1PositiverateofSarcocystiscystsintheslaughteredpigsduringJanuaryandDecemberof2011

MonthNo. slaughtered pigsNo. positivepigs Positive rate /‰186 6661411.62266 9501131.693103 4995485.294103 0833163.07597 7743163.23686 0653794.40779 9123684.60871 0741291.81984 259320.381089 084410.461165 008250.381282 846140.17Total1 016 2202 4222.38

2.2猪源肉孢子虫包囊的形态学观察 肉眼可以观察到新鲜肉样中肉孢子虫包囊呈白色毛根状，与肌纤维平行分布，但是于4 ℃或-20 ℃保存后就不易辨认。有包囊寄生的部位，肌肉组织色泽、硬度、气味一般无明显变化；严重感染虫体密集部位，肌肉色泽变淡。

压片镜检结果显示，在膈肌、颈背侧肌、腰肌、肋间肌和股内侧肌中均发现肉孢子虫包囊，与肌纤维平行，其中膈肌和颈背侧肌包囊寄生密度较大。包囊形态主要有梭形、柳叶状和棒状(如图1-A和1-B)。

组织切片结果显示，肉孢子虫包囊寄生于肌纤维内，与肌纤维纵轴平行。在猪肌肉中存在有厚壁型和薄壁型包囊，其中前者的囊壁呈栅栏状(如图2-A)，后者为一薄层光滑的壁(如图2-B)，包囊内含有大量呈香蕉状的慢殖子(如图2-A和2-B)。参考相关文献，在包囊形态上，来自豫北、豫西地区以及与河南交界的山西部分地区的生猪肌肉中的部分包囊与米氏肉孢子虫相似[3,14]，另外一部分包囊即薄壁型包囊是否是其他虫种需要进一步验证。

图1肌肉压片镜检下的猪源肉孢子虫包囊，呈柳叶状(A和B)。

Fig.1Willowleaf-likecystsofSracocystis(AandB)frompigsdetectedusingmusclesquashingmicroscopicobservation

图2猪肉中肉孢子虫包囊病理组织学观察

A：寄生于膈肌纤维内的包囊，其内部含有大量慢殖子，包囊壁较薄；B：颈背侧肌纤维内的包囊，其壁呈栅栏状厚壁型；C和D：寄生于膈肌纤维内的包囊引起肌纤维变性、萎缩和横纹消失等病理损伤。

Fig.2HistopathologicalobservationofSarcocystiscystsinpork

Two types of cysts, smoothly thin wall of cysts (A) in diaphragmatic muscles of pigs and palisade-like thick wall of cysts (B), in nape of neck side muscle and numerous bradyzoites were present in both cysts (×640). Obvious atrophy of muscles, and disappearance of striation of myofibril is the result of degeneration and necrosis of muscle cells caused by cysts (×400).

2.3包囊引起的组织病变 病理组织观察结果显示，肉孢子虫包囊引起猪膈肌、颈背侧肌等不同部位肌纤维红染变性、坏死、横纹消失，大量寄生有包囊的肌纤维和肌膜之间间隙变宽，引起肌纤维萎缩等病理损伤(如图2-C和D)。说明猪源肉孢子虫包囊对猪也表现明显致病性。

3 讨 论

3.1豫北地区屠宰生猪肉孢子虫感染情况与分析 猪肉孢子虫病于1865年首次在猪的舌肌和心肌中发现，随后世界各地均有报道。国外猪的感染率为0.2%～96%，国内猪感染率为7.76%～80%，不同地区猪感染率差异较大[3-5]。本次调查豫北地区屠宰生猪肉孢子虫包囊检出率为2.38‰,相对国内其他省区的报道[15-16]，结果偏低；与1992年报道[17]豫南地区猪群感染结果相比也较低。其原因可能有以下4点：一是近几年河南省加快标准化养殖建设，形成一大批标准化规模猪场和养殖小区，优化了养殖环境，猪场和养殖户的防疫意识增强，有效的切断了中间宿主与终末宿主(犬、猫和人等)的接触。相对于传统落后的散养，标准化养殖饲养周期短，减少了感染机会；二是本屠宰场为大型屠宰场，严格按生猪屠宰检疫规程的要求实施宰前检疫，宰前检查剔除了部分亚健康生猪，减少了亚健康生猪进入屠宰线,其中可能有部分阳性猪，降低了宰后阳性检出率；三是本次调查是在屠宰流水线上操作，对每头猪的判定有严格的时间限制，可能导致漏检现象；四是猪源肉孢子虫包囊长度仅有0.5～3 mm，形状纤细[7,11,14]，在肉样中容易与肌间脂肪和结缔组织混淆，再加上感染强度较低时，更容易导致漏检问题。因此作者推测豫北地区实际猪肉孢子虫感染率应该高于本实验压片镜检结果。要想弄清猪群中肉孢子虫的真实感染情况，需要建立敏感、特异和快速的免疫学方法如ELISA、免疫检测试纸条，实施宰前的检测和流行病学调查[18-19]。

本实验参考旋毛虫检疫标准[12]，结合猪源肉孢子虫的自身特点，建立了猪肉中肉孢子虫包囊感染强度的统计方法，该方法对实验条件要求较低，结果可靠，利用该方法不仅可以检测新鲜肉样中的包囊，而且还可以检测4 ℃或-20 ℃保存后的样品，但其缺点是敏感性低，操纵繁琐，费时费力。本次研究发现，豫北地区绝大多数阳性猪为轻度至中度感染，这可能与宰前严格剔除亚健康生猪有关。

3.2肉孢子虫包囊的致病性分析 本次研究发现，猪源肉孢子虫包囊能引起猪肌纤维变性、坏死和萎缩等病理变化，进而影响猪机体运动、呼吸和心脏等功能。这与文献报道的猪源肉孢子虫感染能引起猪出现跛行、运动困难和肌炎等症状相一致[3,5]。说明猪源肉孢子虫不仅在肝脏血管内皮细胞内的裂殖生殖阶段对猪有较强致病性，而且在横纹肌和心肌内的包囊对猪也有明显的致病性。因此，在养猪生产和屠宰检疫中应充分认识到猪肉孢子虫病的危害性，并予以重视。

3.3猪源肉孢子虫的公共卫生风险性分析 猪肉孢子虫病其病原目前报道的有3种：米氏肉孢子虫、猪人肉孢子虫和猪猫肉孢子虫，前2种有效性得到公认，而猪猫肉孢子虫其作为独立种的有效性尚有争议。目前已知猪人肉孢子虫的能感染人[1,3,20]。本次调查发现，豫北地区屠宰生猪感染的肉孢子虫包囊分为两类：厚壁型和薄壁型，其中厚壁型包囊的大小和囊壁特征与米氏肉孢子虫相似，该结果也得到分子鉴定结果的证实[7]；另外一种薄壁型包囊是前一种的未成熟包囊还是其他虫种，有待通过分子标记技术等手段进一步验证。

据文献记载[1,21]，近100例病人表现肌肉型肉孢子虫感染，说明人可以作为某些未知肉孢子虫的中间宿主。有文献报道，志愿者食入生猪肉后，除了表现肠型肉孢子虫感染症状外，还出现肌肉疼痛和心肌炎等肌肉型肉孢子虫感染症状[4,21]。推测猪肉中可能含有能感染人肌肉的未知肉孢子虫。本次调查数据显示，豫北地区屠宰生猪肉孢子虫阳性检出率远高于猪囊尾蚴和旋毛虫。据悉，河南省猪囊尾蚴和旋毛虫目前检出率低于万分之一，这与标准化养殖和严格的检疫制度有密切关系[11]。说明目前猪肉孢子虫感染率较高与兽医界和屠宰检疫过程中重视不够有关。猪肉是人们最主要的肉食品之一，而且猪群数量庞大，与人类接触机会较多，猪群中肉孢子虫高阳性率对人类健康构成潜在的威胁。因此，通过分子标记技术对猪源肉孢子虫进行分子流行病学规律研究[22-24]，尤其是揭示对人类具有感染性和致病性的猪源肉孢子虫，具有重要的公共卫生意义。

参考文献：

[1]Fayer R.Sarcocystisspp. in human infections[J]. Clin Microbiol Rev, 2004, 17(4): 894-902. DOI:10.1128/CMR.17.4.894-902.2004

[2]Dorny P, Praet N, Deckers N, et al. Emerging food-borne parasites[J]. Vet Parasitol, 2009, 163(3): 196-206. DOI:10.1016/j.vetpar.2009.05.026

[3]Li XJ, Han LF, Yan WC, et al. A review of sarcocystosis in pigs[J]. Chin J Zoonoses, 2012, 28(7): 90-93. DOI:10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.06.001 (in Chinese)

李小军,韩利方,闫文朝,等.猪住肉孢子虫病的研究进展[J].中国人兽共患病学报, 2012, 28(7): 57-61. DOI:10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.06.001

[4]Taylor MA, Coop RL, Wall RL. Veterinary parasitology[M]. 3rded. Oxford: Blackwell Publishing Company, 2007: 345-347.

[5]Caspari K, Grimm F, Kuhn N, et al. First report of naturally acquired clinical sarcocystosis in a pig breeding stock[J]. Vet Parasitol, 2011, 177(1-2): 175-178. DOI:10.1016/j.vetpar.2010.11.019

[6]Avapal RS, Sharma JK, Juyal PD. Pathological changes inSarcocystisinfection in domestic pigs (Susscrofa)[J]. Vet J, 2004, 168(3): 358-361. DOI:10.1016/j.tvjl.2003.11.006

[7]Yan W, Qian W, Li X, et al. Morphological and molecular characterization ofSarcocystismiescherianafrom pigs in the central region of China[J]. Parasitol Res, 2013, 112: 975-980. DOI:10.1007/s00436-012-3219-9

[8]Li JH, Lin Z, Dou JF, et al. Infective test ofSarcocystissuihominisisolated from Guangxi province[J]. Chin J Parasitol Parasit Dis, 2007, 25(6): 466-468. (in Chinese)

李锦辉，林珍，杜进发，等. 广西猪人肉孢子虫实验感染研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2007,25(6):466-468.

[9]Beijing Oriental Iger Agricultural Consulting Co., Ltd. Analysis on the prospect of Chinese pork industry[J]. Chin J Food Industry, 2008, 3: 10-11. (in Chinese)

北京东方艾格农业咨询有限公司.中国猪肉工业前景分析[J]. 中国食品工业,2008, 3:10-11.

[10]Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China. Quarantine standard of the slaughtered pigs (NY/T909-2004)[S]. Beijing: China Agriculture Press, 2005: 4. (in Chinese)

中华人民共和国农业部.生猪屠宰检疫规范(NY/T909-2004)[S]. 北京：中国农业出版社，2005:4.

[11]Su J, Li WF, Li SH. Identification ofCysticercuscellulosae,TrichinellaspiralisandSarcocystisin slaughtering pigs[J]. J Breeding Feed, 2011, (60): 75. (in Chinese)

苏炯, 李维芬, 李四华.生猪屠宰检疫中囊虫、旋毛虫和住肉孢子虫的鉴别[J].养殖与饲料, 2011, (60) : 75.

[12]General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of P.R.C. Diagnostic techiques for trichinella spiralis in swine (GB/T18642-2002[S]). 2002.2. (in Chinese)

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. 猪旋毛虫病诊断技术(GB/T18642-2002)[S]. 2002.2.

[13]General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of P.R.C. Diagnostic techniques for cysticercosis cellulosae in swine (GB/T18644-2002[S]). 2002.2.

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. 猪囊尾蚴病诊断技术(GB/T18644-2002)[S]. 2002.2.

[14]Lin QW, Liu HH, Wang M, et al. Light and electron microscopic observation ofSarcocystismiescherianain pigs[J]. J South China Agr Univ, 1992, (Suppl): 15-18. (in Chinese)

林庆文，刘海虹，汪明，等. 猪米氏住肉孢子虫包囊的光镜与电镜研究[J]. 华南农业大学学报，1992，(增刊)：15-18.

[15]Chen LY, Zhou BJ, Li CY, et al. A review of epidemiology of Sarcocystis species[J]. Chin J Zoonoses, 2008, 24(7): 675-677. (in Chinese)

陈连勇, 周本江, 李翠英,等. 肉孢子虫流行病学研究进展[J]. 中国人兽共患病学报2008，24(7)，675-677.

[16]Wang RJ, Ji SH, Ji SJ. Prevalence of Sarcocystis infection in slaughtering pigs[J]. Chin J Vet Med, 2006, 42(8): 53-54. (in Chinese)

王荣菊，吉生宏，姬生俭. 屠宰场猪住肉孢子虫感染情况调查[J]. 中国兽医杂志,2006,42 (8):53-54.

[17]Chen HZ, Chen WJ, Yang WM, et al. Investigation of sarcocystosis in Huai’nan pigs[J]. J Henan Agr Sci, 1992, (8): 36-37. (in Chinese)

陈宏智, 陈伟基, 杨文明,等. 淮南猪住肉孢子虫病的调查研究[J]. 河南农业科学, 1992, (8) ：36-37.

[18]Michelle RY, Daniel KH. Improved detection of equine antibodies againstSarcocystisneuronausing polyvalent ELISAs based on the parasite SnSAG surface antigens[J]. Vet Parasitol , 2011, 176(1): 16-22. DOI:10.1016/j.vetpar.2010.10.034

[19]Ma BS, Su SX, Yang ZQ. Research progress on immunology of sarcocystosis[J]. J Yan’an Univ (Med Sci), 2011, 9(1): 15-18. (in Chinese)

马碧书, 苏绍祥, 杨照青. 肉孢子虫免疫学及相关研究进展[J]. 延安大学学报(医学科学版), 2011,9(1):15-18.

[20]Hu JJ, Meng Y, Chen XW, et al. Research progress on human sarcocystosis[J]. Chin J Parasitol Parasit Dis, 2012, 28(6): 460-465. (in Chinese)

胡俊杰, 孟余，陈新文，等. 人肉孢子虫病的研究进展[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2012,28(6): 460-465.

[21]Velasquez JN, Risio CD, Etchart CB, et al. Systemic sarcocystosis in a patient with acquired immune deficiency syndrome[J]. Hum Pathol, 2008, 39: 1263-1267. DOI:10.1016/j.hum path. 2008.01.016

[22]Kia EB, Mirhendi H, Rezaeian M, et al. First molecular identification ofSarcocystismiescheriana(Protozoa, Apicomplexa) from wild boar (Susscrofa) in Iran[J]. Exp Parasitol, 2011, 127(3): 724-726. DOI:10.1016/j.exppara.2010.11.007

[23]Yang ZQ, Li QQ, Zuo YX, et al. Characterization ofSarcocystisspecies in domestic animals using a PCR-RFLP analysis of variation in the 18S rRNAgene: a cost-effective and simple technique for routine species identification[J]. Exp Parasitol, 2002, 102: 212-217. DOI:10.10 16/S0014-4894(03)00033-X

[24]Elsheikha HM, Mansfield LS. Molecular typing ofSarcocystisneurona: current status and future trends[J]. Vet Parasitol, 2007, 149(1/2): 43-55. DOI:10.1016/j.vetpar.2007.06.039