不同产地马齿苋总生物碱的含量测定

2014-04-01扈本荃徐玥高苏亚张宇洁张韫王黎唐前文

应用化工 2014年12期

扈本荃，徐玥，高苏亚，张宇洁，张韫，王黎，唐前文

(西安医学院药学院，陕西西安 710021)

马齿苋为马齿苋科植物马齿苋(Portulaca oleracea L.)的全草，多以其干燥地上部分入药，性味酸寒，具有清热解毒、凉血止血之功效。临床多煎汤内服或并用鲜品捣汁外敷，用于热毒血痢、痈肿疔疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、痔血、崩漏下血等［1］，因此马齿苋具有“天然抗生素”的美称。

马齿苋在2010 版《中国药典》中具有鉴别、炮制、功能主治、用法用量等明确的规定，却对马齿苋中的有效成分及含量无明确要求。从20 世纪60 年代至今，国内外学者已从马齿苋中提出许多化学成分，主要包括有机酸类、生物碱类、黄酮类、萜类、多糖类等多种成分。在这些活性成分中，生物碱是新兴的研究热点之一，很多生物碱成分具有较强的药理作用，例如抗氧化作用，抗肿瘤作用等［2-3］。

本文对不同产地马齿苋中的生物碱的含量进行测定，旨在考察产地对马齿苋中生物碱含量的影响，为马齿苋质量标准的修订提供依据。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

马齿苋药材(产地贵州、四川、北京、贵州，经西安医学院生药教研室张彦副教授鉴定);溴甲酚绿、咖啡因、邻苯二甲酸氢钾等试剂均为分析纯;实验用水为纯化水。

GR-202 型分析天平;UV-762 型紫外可见分光光度计;FW200A 型高速万能粉碎机;DZKW-D 数显恒温水浴锅;R203B 型旋转蒸发仪;SHZ-D 循环水式真空泵;PHS-3C 型pH 计。

1.2 溶液的配制

1.2.1 对照品溶液咖啡因醇溶液的配制，精密称取咖啡因标准品50.87 mg，置于50 mL 容量瓶，加无水乙醇定容，摇匀，质量浓度为0.990 6 mg/mL。

1.2.2 溴甲酚绿缓冲液的配制精密称取溴甲酚绿0.125 0 g，加入80 mL 小烧杯中，用NaOH 溶液12.50 mL 溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2.55 g，加少量蒸馏水溶解后，转移至250 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，调节 pH = 4.4，浓度为0.72 mmol/L。

1.2.3 供试品溶液的配制取马齿苋粗粉约35 g，置于索式提取装置中，用180 mL 无水乙醇连续回流提取16 h。回收乙醇后将所得浸膏倒入烧杯中，用蒸馏水稀释，再用HCl 溶液调节pH 值为3 ～4，搅拌均匀，抽滤。滤液中加入10%的氨水，调节pH 值8～9。用氯仿萃取二次，合并氯仿萃取液。蒸馏，回收氯仿，得黄色液体即为生物碱的粗品。

将生物碱粗品溶于400 mL 水中，用6 mol/L HCl 溶液调节pH 值3 ～4。用乙醚萃取洗涤溶液2次，每次15 mL，弃去乙醚层。水层用10%的氨水调节pH 值10 左右。再用氯仿萃取2 次，合并氯仿层，回收氯仿，即得生物碱的精制品，将其定容为5 mL。

1.3 标准曲线的绘制

精密量取咖啡因乙醇溶液于0，0.5，0.8，1.1，1.4，1.7，2.0，2.3，2.6 mL 于0，1，2，3，4，5，6，7，8号10 mL 容量瓶中，再分别加入1 mL 溴甲酚绿缓冲液和2 mL 无水乙醇溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15 min。用0 号容量瓶中溶液作空白对照，以全波长扫描所得最大波长629 nm 为测定波长，测定60 min 内溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y =2.514 9x+0.016 3，r=0.999 3。

2 结果与讨论

2.1 精密度测定

精密量取0.3 mL 供试品溶液于10 mL 容量瓶中，加入1 mL 溴甲酚绿缓冲液和2 mL 无水乙醇溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15 min。另取10 mL 容量瓶依法配制空白对照，放置15 min。进行6 次含量测定，结果A =0.366，0.366，0.366，0.365，0.365，0.366，其RSD=0.1%，仪器精密度非常良好。

2.2 重复性实验

分别精密量取0.3 mL 6 份供试品溶液于10 mL容量瓶中，配制溶液与空白对照，放置15 min 后，对其进行含量测定，吸光度分别为0.392，0.364，0.364，0.366，0.364，0.365，计算生物碱含量，其RSD=0.1%。

2.3 稳定性实验

精密吸取0.3 mL 供试品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液与空白对照，放置15 min 后，每隔15 min测量1 次，测量1 h。结果A =0.399，0.409，0.415，0.417，RSD=1.9%。

2.4 加样回收率测定

按照马齿苋总生物碱提取方法，称量咖啡因标准品30 mg，加入35 g 贵州马齿苋粗粉中，混匀提取。同法操作提取6 份供试品溶液。

精密吸取0.3 mL 供试品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液与空白对照，放置15 min 进行含量测定，计算生物碱含量，结果见表1。

表1 加样回收率测定(n=6)Table 1 Result of recovery experiment(n=6)

2.5 样品测定

精密量取0.3 mL 贵州、四川、北京、西安产马齿苋供试品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液与空白对照，放置15 min 后进行含量测定，结果见表2。

表2 不同产地马齿苋总生物碱含量(n=6)Table 2 Result of alkaloid content test (n=6)

由表2 可知，4 种产地马齿苋总生物碱含量为:贵州0.090%，四川0.066%，北京0.076%，西安0.059%，含量大小为贵州＞北京＞四川＞西安。

王仲英［4］用乙醇回流法对太原马齿苋总生物碱回流提取9 h，其含量检测结果为21.90 mg/kg，与本实验结果存在明显差距，在不排除提取时间影响外，间接地反映了产地对其含量的影响。王仲英实验结果虽然远小于本实验，但谢彦用［5］超生辅助酶解法提取出的滨州马齿苋总生物碱含量为0.36%，又比本实验含量最高的贵州多了3 倍。

马齿苋在2010 版药典中具有鉴别、炮制、功能主治、用法用量等明确的规定，却对总生物碱含量无明确要求，但实验结果表明，不同产地马齿苋总生物碱含量具有明显差异，选择不同产地马齿苋期临床疗效将有所不同，给临床用药带来一定困惑，因此建议《中国药典》在修订时，能够对马齿苋药用成分含量做出明确规定，以保证临床疗效的一致，便于马齿苋在临床的更好应用。