张 娅,项朋志,温 敏

(1.云南省中医中药研究院中心实验室，云南 昆明 650223；2.云南开放大学化学工程学院，云南 昆明 650222)

中药黄精是百合科黄精属多种植物根茎的总称，我国有30多种[1]。中国药典收载了黄精(PolygonatumsibiricumRed.)、多花黄精(PolygonatumcyrtonemaHua.)和滇黄精(PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.)3种植物为原生药[2]。我国各省市均有分布，主要集中在贵州、云南、四川、内蒙古、辽宁、吉林、黑龙江、河北、安徽、湖北等省。黄精性平、味甘，入脾、肾、肺经，具有提高免疫力、降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等药理作用[3-4]。黄精在临床上主要用于治疗糖尿病、冠心病、高脂血症、白细胞减少症和艾滋病等。研究表明，黄精主要含多糖、低聚糖、黄精皂苷、氨基酸、黄酮及微量元素等活性成分。现代药理研究表明，黄精多糖对老龄大鼠淋巴细胞百分率、红细胞、晶体核、晶体皮质超氧化物歧化酶(SOD) 活性、肝脏和肾脏脂褐质含量、心脏脂质过氧化产物含量、脑中β型单胺氧化酶活性均有明显的改善作用[5]。

将野生滇黄精引种到云南山地仿野生抚育，一年后将其块根进行无性繁殖，得到一年后子代植株；又将一年后子代块根进行无性繁殖，得到二年后子代植株。对引种的野生黄精、一年后子代、二年后子代植株的块根进行主要有效成分——黄精多糖的含量测定及比较，拟为进一步评价黄精仿野生抚育后药材品质及安全性提供依据。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

新鲜的黄精地下块根(引种野生黄精、一年后子代、二年后子代),采自云南省文山地区西畴县中药材仿野生种植基地。

葡萄糖标准品，中国药品生物制品检定所；蒽酮、硫酸、乙醇，分析纯，广东华光科技股份有限公司；实验用水均为超纯水。

Sartorius BT 224S型分析天平；DFT-200型手提式高速万能粉碎机，温岭林大机械有限公司；DZF-6020型真空干燥箱，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；KQ-350M型超声清洗仪，东莞科桥超声设备有限公司；XMTD-4000型电热恒温水浴锅，北京永光明医疗仪器厂；ELGA Classic UF型超纯水系统；TU-1900型双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2 方法

1.2.1 标准曲线的绘制

精密称取干燥至恒质量的无水葡萄糖对照品33 mg置于100 mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液。分别精确吸取葡萄糖对照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL置于标号具塞试管中,再分别补水至2 mL，摇匀；在冰水浴中缓缓精密滴加8 mL 0.2%蒽酮-硫酸溶液，混匀,放冷后置水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出；以同样方法处理的蒸馏水样为空白，在582 nm波长处测定吸光度(A)。以吸光度为纵坐标、葡萄糖浓度(c)为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.2 供试品溶液的制备

将黄精(引种野生黄精、一年后子代、二年后子代)植株的取样块根切片后置真空干燥箱中，60 ℃干燥至恒质量。精密称取约0.25 g，置具塞锥形瓶中，加80%乙醇150 mL，超声处理20 min，趁热过滤，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL；将残渣及滤纸置锥形瓶中，加水150 mL，超声处理20 min，趁热过滤，残渣及锥形瓶用热水洗涤4次，每次10 mL；合并滤液与洗液，放冷，转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，再精密量取1 mL水加至试管中，摇匀，按1.2.1方法测定吸光度，由回归方程得多糖溶液的浓度，计算黄精多糖的含量。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线(图1)

图1 对照品的标准曲线

由图1可知，在3.3～19.8 μg·mL-1范围内，葡萄糖浓度与吸光度呈良好的线性关系。拟合回归方程为：A=0.01507c+0.06107，R=0.9992。

2.2 引种野生黄精、一年后子代药材、二年后子代药材中多糖含量的测定结果(表1)及比较

由表1可知，引种野生黄精经过仿野生抚育后，其子代药材中多糖含量均高于原引种药材，且一年后子代药材中的多糖含量明显高于二年后子代药材。该结果将为今后黄精的仿野生抚育后不同繁殖代中多糖含量变化趋势的判断提供参考，为确定最佳采收年限提供依据。

表1仿野生抚育后不同繁殖代药材中的多糖含量

Tab.1The contents of polysaccharide of seedlingsand different breeding generations

2.3 讨论

由于人工栽培的黄精量一直较小，因此其来源以野生药材为主，但是随着黄精需求量的日益增加，黄精的生态环境遭到破坏，导致野生资源急剧减少，由此人们逐渐开始对黄精的野生变家种栽培技术、高产栽培技术等进行研究，并做了许多开创性的工作[6-9]。基于这样的现状，作者将野生黄精引种到山地进行仿野生抚育，在其生长过程中除了每年采挖块根进行子代繁殖外，让其在自然环境中生长，不再进行任何人为的干预，这是黄精的栽培研究的首次尝试， 以期能成为缓解野生黄精资源枯竭的有效而可行的途径。

黄精经过仿野生抚育后，其有效成分多糖总体呈上升趋势，这与潘德芳等[10]报道的九华山地区的不同育成年份的黄精中多糖的含量变化基本相同。但作者创新性地考察子代与母代之间含量变化趋势，并不是单一考察生长年限对含量的影响。

几年来，通过对黄精进行山地仿野生抚育，初步发掘到了仿野生抚育的优势：既能够保证产出药材的安全(减少重金属、农药残留等)，也能够保证产出药材的有效成分含量，这是解决黄精野生种群退化、野生资源日益枯竭的有效途径，相关研究将继续深入。

3 结论

将野生黄精进行山地仿野生抚育，为初步评价其抚育后子代药材的质量，采用紫外分光光度法对引种种苗药材、一年后子代药材、二年后子代药材中的有效成分黄精多糖进行含量测定和比较。结果表明：子代药材中的有效成分含量比种苗药材中的明显上升，一年后子代的有效成分含量明显高于二年后子代，其有效成分代谢积累机制有待进一步的研究。

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第十五卷)[M].北京:科学出版社,1978:52-80.

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[6] 郭予元.探讨21世纪我国植物保护策略和技术的发展趋势[C]//面向21世纪的植物保护发展战略.北京:中国科学技术出版社,2001：83-86.

[7] 黄大.植物保护生物技术的发展与思考[C]//面向21世纪的植物保护发展战略.北京:中国科学技术出版社,2001：87-90.

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[10] 潘德芳,吕杨,陈伟民,等.紫外可见分光光度法测定不同年份黄精中多糖含量[J].安徽农业科学,2011,39(10)：5790-5795.