童卉琦，周平，白金，马楠，宋伶俐，金向群

(吉林大学药学院，长春130012)

参绒洁阴泡沫剂由苦参、赤芍、蒲公英、白鲜皮、鹤虱等中药组成。具有清热解毒、杀虫止痒之功效，可有效治疗阴道炎引起的外阴瘙痒、发热、灼热、白带增多、异味、不适等症状[1]。本试验修订了蒲公英和赤芍的薄层鉴别方法，对处方中蒲公英、赤芍、鹤虱和白鲜皮进行了鉴别，同时对苦参进行了含量测定，制定了本泡沫制剂的质量标准。

1 仪器与试剂

1.1仪器

AB204-N分析天平( 梅特勒-托利多仪器有限公司 )；JT2001电子天平(上海精天电子仪器有限公司)；KQ-250D数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；LC-10AT高效液相色谱仪(SHIMADZA公司)。

1.2试剂

参绒洁阴泡沫剂(百奥生物技术有限公司，批号：20091105)；咖啡酸标准品、芍药苷标准品、鹤虱对照药材、腀酮标准品、苦参碱标准品(吉林省药品生物制品检定所)；甲醇、乙腈、无水乙醇(色谱级，Fisher Scientific公司)；水为3蒸水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1蒲公英薄层鉴别

取10mL参绒洁阴泡沫剂蒸干，加甲醇20mL，加热回流30min，滤过，蒸干。残渣加水10mL使其溶解，滴入3滴甲酸，用乙酸乙酯振摇萃取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液。再取按处方量及制备工艺制备的阴性样品制成阴性样品溶液。另取咖啡酸对照品加甲醇制成0.5mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法进行试验。吸取上述3种溶液4μL[2]，分别点于同硅胶G板上，其中供试品溶液重复点样3次作为平行对照。以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)为展开剂展开，取出并晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相对应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点，且阴性无干扰(图1)。

2.2赤芍薄层鉴别

取参绒洁阴泡沫剂10mL，通过处理好的D101大孔树脂柱(内径1.5cm，柱高10cm)，用200mL水洗脱，再用50mL乙醇洗脱，蒸干，残渣加无水乙醇2mL使其溶解，作为供试品溶液。取芍药苷对照品，加无水乙醇制成0.5mg/mL的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法进行试验，吸取上述2种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G板上，其中供试品溶液重复点样3次作为平行对照。用氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)[3]作为展开剂，展开，取出并晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无烦扰，重现性较好(图2)。

2.3鹤虱薄层鉴别

取参绒洁阴泡沫剂10mL蒸干，加石油醚(60℃～90℃)50mL，超声萃取45min，滤过，取滤液浓缩至2mL。再取按处方量及制备工艺制备的阴性样品制成阴性样品溶液。另取对照药材1g，同供试品方法制备，作为对照品。吸取上述供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照品各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，其中供试品溶液重复点样3次作为平行对照。以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(3∶2)为展开剂，预饱和15min，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(图3)。

2.4白鲜皮薄层鉴别

取10mL参绒洁阴泡沫剂蒸干，加甲醇50mL，超声30min，滤过，取滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液。再取按处方量及制备工艺制备的阴性样品制成阴性样品溶液。取腀酮对照品，加甲醇制成1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。取上述3种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G板上，其中供试品溶液重复点样3次作为平行对照。以石油醚(60℃～90℃)-乙酸乙酷(8∶2)为展开剂，展开，取出并晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰[4]。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(图4)。

2.5参绒洁阴泡沫剂中苦参碱的含量测定

2.5.1高效液相色谱条件以氨基键合硅胶为填充剂；流动相中有机相为乙腈-无水乙醇(80∶10)，水相为3%磷酸溶液，将有机相与水相以94.6∶5.4的比例作为流动相；检测波长220nm。理论塔板数按苦参碱峰计算应不低于2000。

2.5.2对照品溶液的制备取苦参碱对照品适量，加乙腈-无水乙醇(80∶10)混合溶液制成0.1mg/mL的苦参碱溶液。

2.5.3供试品溶液的制备精确量取10mL参绒泡沫剂溶液，蒸干，加入浓氨水0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，密封，称重。超声30min，用三氯甲烷补足重量，摇匀，过滤。取续滤液10mL，置水浴锅上蒸干。用无水乙醇溶解，转移至10mL容量瓶中，定容，备用。

2.5.4线性范围考察精密称取减压干燥4h的苦参碱标准品适量，配制成0.1004mg/mL的苦参碱对照品溶液。分别精密吸取该对照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL注入液相色谱仪中进行测定(表1)。

表1苦参碱线性测定结果

Table 1The result for the linear relationship of matrine

以进样量为横坐标、峰面积值为纵坐标作图，得一条直线(图5)。回归方程为y=38 469.45x+35 944.466，R=0.999 52。结果表明，苦参碱进样量在0.502μg～2.51μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.5.5精密度考察取同一供试品溶液10μL，重复进样6次，计算相对标准偏差，RSD为0.4005%(表2)。结果表明本实验方法精密度良好。

表2精密度考察

Table 2Precision inspection

2.5.6重现性实验取参绒洁阴泡沫剂10mL，6份，精密称定，按“2.5.3”项下方法制备试品溶液，进样量为10μL，测定苦参碱的含量(表3)。RSD值为0.9165%，结果表明本实验方法重现性良好。

表3重现性实验结果

Table 3Reproducible test results

2.5.7稳定性实验分别取放置2h、4h、6h、12h、16h、24h的供试品溶液，测定苦参碱含量，以考察其稳定性。RSD值为0.8307%，表明供试品溶液至少在24h内稳定(表4)。

表4稳定性考察

Table 4The stability test

2.5.8加样回收率实验取精密称定的苦参碱对照品，加入已知苦参碱含量的样品制剂5mL(苦参碱含量为0.3052mg/mL，详见重现性试验)，蒸干，按“2.5.3”项下方法操作，制备供试品溶液，测定苦参碱的含量，计算回收率(表5)。结果表明平均回收率为99.8%，RSD值为1.002%，本实验方法回收率良好。

表5苦参碱回收率实验结果

Table 5The recovery result of the matrine

2.5.9参绒洁阴泡沫剂中苦参碱的含量测定按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，测定3批参绒洁阴泡沫剂中苦参碱的含量(表6)。结果表明，参绒洁阴泡沫剂中苦参碱含量稳定，可作为本制剂含量测定的标准。

表6参绒洁阴泡沫剂中苦参碱的含量测定结果

Table6ThequantitativedeterminationofShenRongJie-Yinfoam

NO苦参碱的含量(mg/mL)Thecontentofmatrine每瓶泡沫剂含苦参碱的量(mg)Thecontentofmatrineinperbottle103059153202960148303289164平均average03103155

3 分析与讨论

3.1 原处方中蒲公英鉴别阴性样品会产生干扰，故作者采用多种展开剂进行试验。首先使用乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)[3]的上层液为展开剂，但发现Rf值并不理想；随后采用苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶1∶1.5∶5)[5]展开剂进行展开，能有效去除阴性样品的干扰，但是由于苯为毒性试剂，不提倡使用；氯仿-甲醇-甲酸(9∶3∶1)极性过大，氯仿-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)又有阴性干扰。最终本实验加长了以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)作为展开剂的展开距离，有效除去了阴性干扰，使用效果更好，提高了蒲公英薄层鉴别的鉴定效果。

3.2 赤芍鉴别中阴性样品产生干扰，故作者采用了多种展开剂，包括氯仿-甲醇(1∶1)[6]、醋酸乙酯-冰醋酸-甲酸-水(15∶1∶1∶2)[7]等，效果均不理想。考虑到原提取方法繁琐，干扰因素较多，故采用大孔树脂的方法进行乙醇洗脱，蒸干。结果显示，此方法简单，分离效果好。

3.3 由于药典收载的鹤虱的薄层鉴别方法是采用乙醚萃取，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶1∶1)为展开剂，显色，效果明显，但是由于试验中使用甲苯，不如本试验使用的展开剂安全性高，故不选用此方法。

3.4 由于药典收载的白鲜皮的薄层鉴别方法是采用甲醇进行提取，以甲苯-环己烷-乙酸乙酯(3∶3∶3)为展开剂，显色，效果明显，但是由于试验中使用甲苯，不如本试验使用的展开剂安全性高，故不选用此方法。

3.5 本实验建立的参绒洁阴泡沫剂质量控制方法稳定、可靠，能准确地进行定性、定量检测，可用于参绒洁阴泡沫剂的质量控制。

[1]张金萍,毛丽超,王诗惠，等.参绒洁阴洗液的处方研究[J].特产研究,2012,(1):44-46.

[2]冯婉姗,黄杰伟,徐志伟，等.滴通鼻炎水的薄层色谱鉴别[J].现代食品与药学杂志,2007,17(1):51-52.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[K].北京:中国医药科技出版社,2010:188.

[4]刘丽丽.参芍洁阴泡沫剂的研究[D].长春:吉林大学,2010.

[5]陈美红,曾晓英.复方制剂中苦参与蒲公英的鉴别[J].湖南中医杂志,1997,13(2):89-90.

[6]高东藩,杨胜华.赤芍及几种中成药中赤芍的薄层层析鉴别[J].华西药学杂志,1992,7(4):213-215.

[7]邓开英.桂枝合剂中芍药甙和甘草的薄层色谱鉴别[J].中国药业,2000,9(6):19.