宗 鸣 李 森 牛运祺 白玉华 王 宽 李冰洁 孙宏丽

1.哈尔滨医科大学大庆校区，黑龙江大庆163319；2.大庆人民医院，黑龙江大庆163316

柿霜吡哌酸粉双层缓释口腔贴膜的制备及评价

宗 鸣1李 森1牛运祺2白玉华1王 宽1李冰洁1孙宏丽1

1.哈尔滨医科大学大庆校区，黑龙江大庆163319；2.大庆人民医院，黑龙江大庆163316

目的制备柿霜吡哌酸（PPA）粉双层缓释口腔贴膜，并对其进行质量评价。方法评价贴膜的膜外观、体外黏附力、溶解时间和口腔黏附时间，测定贴膜中PPA含量及贴膜的体外释放度，评价其体外释药行为。结果口腔贴膜的体外黏附力为137 g/cm2，溶解时间为22.74min，口腔黏附时间为23.59 min。含量测定结果显示，PPA量在0.18～0.54mg/mL之间有良好的线性关系（r=0.9965），回收率为100.54%，RSD=0.78%（n=6）。体外释药行为符合一级动力学方程。结论柿霜PPA粉双层缓释口腔贴膜处方及制备工艺合理可行，质量符合要求。

柿霜；吡哌酸；口腔贴膜；体外释放；评价

鼻咽癌、喉癌等头颈部恶性肿瘤在接受放疗和化疗过程中常出现口腔黏膜糜烂和溃疡，给患者造成痛苦，甚至影响治疗。中医学认为实邪热毒侵及人体耗阴伤津，水不制火，邪热上炎，而致口舌生疮，放射性损伤属火热毒邪[1]。柿霜是柿饼生产后期与储藏过程中在其表面出现的白色粉状物，有润燥、化痰、止咳的作用[2]，吡哌酸（Pipemidic acid，PPA）为喹诺酮类抗菌药，有较好的抗菌和促进溃疡愈合的作用。已有研究表明，将柿霜PPA粉联合用药用于口疮、咽喉痛的治疗，可治疗放射线引起热盛耗津所致的口腔溃疡[3]。但药物制成散剂后，比表面积增大使得一些有效成分不稳定，患者的依从性很差，且使用不太方便，生物利用度较低，难以发挥持久的药效，需反复多次给药，目前本处方一直缺乏有效剂型。为克服上述缺点，选择使用生物黏附制剂直接作用于口腔溃疡部位是一种有效的方法[4]。本研究以中药柿霜与西药PPA为治疗药物，以海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、壳聚糖为载药膜材料，乙基纤维素作为空白隔离层，制成一种具有保护层和黏附层的双层缓释口腔贴膜剂。壳聚糖还具有生物相容性和降解性良好，有抗菌消炎止血的作用，可促进口腔黏膜的再生、修复和愈合[5]。该剂型具有用药方便，延长药物滞留时间，提高生物利用度，减少给药次数，达到局部治疗的优点。本实验从该剂型膜外观、体外黏附力、溶解时间和口腔黏附时间四个方面进行考察，采用紫外分光光度法测定有效成分PPA的含量，并对其体外释药行为、稳定性进行初步评价。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子天平（天津天马衡基仪器有限公司）；DF-101S型集热式磁力式加热搅拌器（河南省予华仪器有限公司）；101-4-BS电热鼓风干燥箱（海跃进医疗器械厂）；756MC紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；RC-6智能药物溶出仪（天津新天光）；黏附力测定仪（自制）。

1.2 试药

柿霜（市售）；PPA（山东新华制药股份有限公司，批号：1104179）；PPA对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100151-199202）；壳聚糖（BIOSHARP）；明胶（北京奥博星生物技术有限责任公司）；卡波姆（青岛天力源生物科技有限公司）；乙基纤维素，羧甲基纤维素钠（CMC-Na），海藻酸钠，丙三醇均为天津市大茂化学试剂厂产；无水乙醇（沈阳市华东试剂厂）；其余试剂均为分析纯；纯化水（自制）。

2 方法与结果

2.1 双层口腔贴膜的制备

在干净的玻璃板上均匀地涂上吐温-80与酒精的混和液（1∶2）作脱膜剂，称取乙基纤维素2.5 g，加入无水乙醇100 mL，充分溶胀溶解。倒入玻板上，自然晾干作为空白隔离层膜备用。

取海藻酸钠1 g，壳聚糖2 g，CMC-Na 1 g，加适量蒸馏水静置24 h后，充分溶胀，完全溶解，备用。将柿霜和PPA（5∶1）4 g溶于6mL丙三醇中，混匀，加入备用液中。加蒸馏水至200mL。将载药层成膜溶液用匀浆流延成膜法铺于空白隔离层膜上，40℃干燥成膜，启膜，裁成3 cm×3 cm，紫外灯下灭菌30 min，即得。分别制成批号为20140304、20140305、20140306三批口腔贴膜。

2.2 性状

三批口腔贴膜均为黄色半透明的双层薄膜，表面光洁平滑无气泡，厚度一致，质地柔韧，色泽均匀。

2.3 体外黏附力的测定

用橡皮法测量膜的黏附力，取橡皮（2 cm×3 cm）两块，一块固定于台面为下橡皮，另块与托盘天平相连为上橡皮，平衡天平。取与橡皮大小一致的药膜一张.黏于下橡皮表面（预先用少量蒸馏水将上、下橡皮湿润），将上橡皮置于膜上，加5 kg重物压90 s，移去重物，加砝码，以5 s内上、下橡皮分离为标准，所加砝码重量即表示膜的黏附力[6]，结果见表1。

表1 口腔贴膜体外黏附力、黏附时间和溶解时间测定结果

2.4 口腔黏附时间的测定[7]

6名健康志愿者，年龄20～40岁。将三批双层膜黏附层贴于受试者口腔颊部，压迫30 s，通过唾液自然润湿后黏附。记录双层膜脱落的时间，结果见表1。

2.5 溶解时间的测定[8]

将100 mL蒸馏水放入烧杯中置于电磁搅拌器上，37℃恒温水浴，搅拌速度30 r/min，将三批测试膜（1 cm×1 cm）放入水浴中并开始计时，记录膜剂溶解的时间。结果见表1。

2.6 贴膜中PPA含量的测定

2.6.1 标准曲线制备精密称定PPA对照品0.018 g，加100 mL水制成每毫升含PPA 0.18 mg的对照品溶液。取0.18mg/mL的PPA标准溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL置100 mL量瓶中，加0.04%氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，在273 nm的波长处测定吸光度，用1 cm比色皿测定样品的吸光度为x，以y（PPA含量）为纵坐标计算出其回归方程为：y=0.998 36x+0.0043（r=0.9965），结果表明PPA在0.18～0.54 mg/mL之间有良好的线性关系。见图1。

图1 吡哌酸溶液标准曲线

2.6.2 供试品溶液制备取口腔贴膜3批（批号：20140304、20140305、20140306），精密称重，置100m L容量瓶中，加0.04%氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置100 mL量瓶中，加0.04%氢氧化钠溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.6.3 精密度实验分别精密吸取PPA对照品溶液2 mL，分别于1 d内测定6次吸光度和连续6 d测定吸光度（波长=273 nm)，结果可知日内和日间精密度吸光度平均值均为0.347，RSD值分别为0.20%和0.28%，日内和日间精密度均小于2%，表明含量测定方法具有较高的精密度。

2.6.4 重复性试验称取同一批号（批号：20140306）口腔贴膜各5份，精密称定重量，按“2.6.2”项下制备供试品溶液，在273 nm测定吸光度，试验结果表明，本方法重复性较好，RSD为1.86%。

2.6.5 回收率实验精密称取同一批供试品（批号：20140306）6份，每份约0.15 g。分别加入PPA对照品溶液（1.23mg/mL）3.5、5.5、7.5mL，分别按“2.6.2”方法制得供试品溶液，测定吸光度，每个浓度平行操作2份，计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收率实验结果

由表2可知，高、中、低三中剂量的溶液回收率均高于98%，RSD小于2%，表明回收率较高，方法可靠。

2.6.6 稳定性试验取同一批供试品（批号：20140306），按供试品制备方法制备供试品溶液。分别在0、2、6、12、24 h时，测定吸光度。结果RSD为1.05%（n=5），小于2%，表明样品测定数据在24 h之内是稳定的。

2.6.7 样品含量测定取本品3批，按供试品含量测定项下操作，在273 nm的波长处测定吸光度，代入回归方程计算含量。结果见表3，3批样中含PPA的平均值为4.64%。。

表3 双层贴膜中吡哌酸含量测定结果

2.7 体外释放度的测定

按《中国药典》2010年版二部附录XC第三法规定膜剂的溶出度[9]，溶出介质为100 mL人工唾液（2.38 g Na2HPO4，0.19 g KH2PO4，0.8 g NaCl溶于1000 mL水），温度为（37±0.5）℃，转速为50 r/min。将贴膜（批号：20140306）贴于玻片上，置于人工唾液中。实验开始后5、10、15、20、25、30、35、45 min各取样5 m L。同时补充溶出介质5 mL，0.45μm微孔滤膜滤过后测定PPA含量，以药物的累积释放百分数（Q）对时间（t）作释放曲线图，结果见图2。用Excel对释放特性进行模型拟合，分别以零级、一级动力学方程、Higuchi方程、Peppas方程、对释药数据进行拟合，求出相关系数（r）。结果显示，一级方程的相关性最好，回归方程为：ln（100-Q）=-0.1462x+5.5012（r=0.9962）。表明本实验研制的膜剂药物在37℃人口唾液中呈一级释放。

3 讨论

本方法制得的双层口腔贴膜是新型缓、控释系统，也是一种有效的口腔黏膜给药系统。以2.5%乙基纤维素乙醇液为双层膜的空白隔离层，克服唾液对载药层的溶解作用，保证药物单向缓慢释放。笔者经过前期制备工艺研究，选择以海藻酸钠-羧甲基纤维素钠-壳聚糖（1∶1∶2）制成载药膜制备成双层口腔贴膜，有良好的成膜性和黏附性，外观均匀，光滑，有利于伤口愈合。

该双层口腔贴膜采用中西药结合组方，柿霜通过紫外波谱扫描可知，制剂中柿霜多糖与成膜材料在490 nm处有共同的吸收峰，表明柿霜多糖在490 nm处有成膜材料的干扰。有研究表明，柿霜中糖含量占总重量的78.31%，还原糖占58.21%[10-11]。而处方中壳聚糖是天然多糖中唯一的碱性多糖[11]。因此对柿霜多糖进行定性鉴别也易受到成膜材料的干扰，鉴别口腔贴膜中柿霜多糖的专属性不强，有待进一步研究。而制剂中PPA的含量容易测定，且无成膜材料干扰，通过一系列预实验，选择PPA为含量控制的指标成分。结果表明，该处理方法，杂质含量少，通过线性化范围实验，精密度实验，重复性实验，加样回收率测定，稳定性考察等，证明本法结果稳定，切实可行。

据研究表明，黏附力在100～150 g/cm2既可保证一定的口腔滞留时间，又不至于产生黏膜损伤，黏附力接近150 g/cm2为佳[12]，本研究对该双层口腔贴膜进行了初步的质量评价，按海藻酸钠∶CMC-Na∶壳聚糖（1∶1∶2）制得的载药膜黏附力适中，不易脱落，质量稳定，具有使用方便、容易给药、避免首过效应、提高生物利用度、达到局部和全身治疗的优点，适合幼儿、老人和吞咽困难患者用药的一种新型缓、控释系统，也是一种有效的口腔黏膜给药系统[13]。其口腔给药后药物渗透性、血药浓度变化和生物利用度有待进一步研究。

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Preparation and evaluation of dried persimmon icing and PPA Bilayer Sustained Release Oral Film s

ZONGMing1LISen1NIU Yunqi2BAIYuhua1WANG Kuan1LIBingjie1SUN Hongli1
1.Harbin Medical University(Daqing),Heilongjiang Province,Daqing 163319,China;2.Daqing People′s Hospital, Heilongjiang Province,Daqing 163316,China

Objective To prepare and evaluate persimmon icing and PPA Bilayer Sustained Release Oral Films. M ethods The formulation of Bilayer Sustained Release Oral Films of film appearance,adhesion,dissolution time and the oral cavity retention time were evaluated.Themethods to determine the in vitro release rate of the oral films and to evaluate its release behavior in vitro were investigated.Results The average adhesion was 137 g/cm2,themean dissolution timewas 22.74 min,the oral cavity retention timewas 23.59 min.The linear range of PPA were 0.18-0.54 mg/mL (r=0.9965).The average recovery rate was 100.54%,RSD=0.78%（n=6）.In-vitro releasewas fitted to first-order kinetic equation.Conclusion The preparation technique of persimmon icing and PPA Bilayer Sustained Release Oral Films is reasonable and practicable.Quality of the films canmeet the requirement.

Dried persimmon icing;Pipemidic acid;Oral films;In vitro release;Evaluation

R283

A

1673-7210（2014）09（c）-0083-04

2014-06-16本文编辑：卫轲）

黑龙江省卫生厅科研课题（编号2011-235）；黑龙江省青年科学基金项目（编号QC2011C099）。

宗鸣（1981-），女，硕士研究生；研究方向：新药研发。

孙宏丽（1974-），女，博士，教授，博士生导师；研究方向：药理学。