张明杰

（广东紫金正天药业有限公司，河源 517000）

重组酵母产人IFN-α2a与LL-37融合蛋白的工艺优化

张明杰

（广东紫金正天药业有限公司，河源 517000）

通过单因素试验探索重组酵母P. pastoris GS115LI产人LL-37基因与IFN-α2a融合蛋白的最佳条件。结果显示，重组酵母菌产蛋白酶的最佳表达条件是利用BMMY为诱导培养基，以接种量OD600=5.5、温度26℃、pH6.0、诱导剂（甲醇）为每隔24 h添加1.0%、振荡速度为200 r/min条件下连续诱导144 h。在最佳培养条件下，发酵液中的LL-37最高抗菌活性达27.9 mm。与初始的发酵条件相比，人LL-37基因与IFN-α2a融合蛋白的产量提高了32.29%。

干扰素α2a LL-37 工艺

英国科学家Isaacs和Lindenmann于1957年发现一种能干扰病毒感染的细胞因子，命名为干扰素［1］。随着人类研究的深入，不断发现了许多新的干扰素分子。目前，人类在哺乳动物中发现的干扰素共有10个家族，其中人干扰素有7个家族。按其功能和作用方式，可将人干扰素细分为I型、II型和III型。I型包括α、β、ε、τ、ω、κ，具有抗病毒和抗肿瘤的功能；II 型包括γ，具有调节免疫的功能［2］；III型为干扰素样蛋白，功能与I型类似，但受体不同［3］。人IFN-α2a是由165个氨基酸残基构成，具有防治病毒性疾病［4］和恶性肿瘤［5］的功能。LL-37是目前在人体内发现的抗菌肽Cathelicedin家族中唯一的成员，对革兰氏阳性菌和阴性菌均具有较广谱的抗性［6］。除此之外，LL-37还具有免疫调节作用，可趋化单核细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞和肥大细胞等［7］。当人体受到病原微生物、炎症或创伤刺激，LL-37的表达水平就会上升［8］。动物试验表明，LL-37可明显降低铜绿假单胞菌感染小鼠的死亡率［2］。

将人LL-37基因与IFN-α2a融合表达，形成同时具有抗病毒、抗肿瘤和抗菌的三重功效的新功能蛋白，在一些特殊的临床治疗中存在潜在的市场需求。……