刘澜澜庄艳娜于晓红曾祥伟

（1.黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨 150040；2.东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨 150040）

绿头鸭IFN-α的可溶性表达及其活性分析

刘澜澜1庄艳娜2于晓红1曾祥伟2

（1.黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨 150040；2.东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨 150040）

为了利用原核表达系统研制有生物活性的鸭IFN-α。以pMD18T-MaIFN-α为模板扩增绿头鸭IFN-α成熟肽基因，将其克隆至原核表达载体pET-32a中，在大肠杆菌BL21中进行变温诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果，并用Western blotting进行验证。Ni2+树脂柱纯化目的蛋白后，测定其生物活性。结果表明，重组pET-32a（+）-MaIFN-α在大肠杆菌BL21成功表达，主要以可溶性形式存在，Western blotting分析显示目的蛋白具有良好的抗原性。细胞病变抑制法测定重组鸭IFN-α的抗病毒活性约为8×104U/mL；荧光定量PCR方法检测显示表达的重组鸭IFN-α使NDV在DEF上的复制受到了明显的抑制，48 h时间点相对抑制率高达91%。这些都表明表达的重组鸭IFN-α具有良好抗病毒活性。

绿头鸭 IFN-α 可溶性表达 活性分析

干扰素（Interferon，IFN）是具有良好的抗病毒、抗肿瘤活性和免疫调节作用的细胞因子［1-3］。目前IFN可分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型IFN 主要包括IFN-α、β、ω、δ、κ、ε、ξ 和τ 等，Ⅱ型IFN 只有IFN-r一种［4］。其中α-干扰素以其突出的抗病毒效应而备受重视，其抗病毒、抗肿瘤活性作用要明显强于Ⅱ型IFN；同时也具有一定的免疫调节作用，但要弱于Ⅱ型IFN。

鸭IFN-α的开放阅读框架由576个核苷酸组成，编码191个氨基酸，前30个氨基酸为信号肽，后161个氨基酸为成熟活性蛋白。1995年Schultz等［5］首次成功克隆了鸭I型干扰素基因。国内从2000年开始陆续有关于鸭干扰素的报道，目前北京鸭、番鸭、绍兴鸭和四川麻鸭等的序列先后被克隆和测定［6-9］。……