张明超　曾彩虹

Alport综合征(AS)是以血尿、感音神经性耳聋及进行性肾功能减退为临床特点的遗传性肾脏疾病。目前国内外诊断该病常根据临床特点、家族史、肾活检标本电镜检查、遗传学诊断及免疫组织化学诊断等方法[1-3]。该病发病机制是编码Ⅳ型胶原α链基因突变导致基膜损伤。其中采用抗Ⅳ型胶原不同α链单克隆抗体,对肾活检及皮肤活检组织行免疫荧光染色,对X连锁型AS患者的诊断、基因携带者的筛查及遗传型的判断有重要价值[ 4-6]。虽然越来越多的证据表明Ⅳ型胶原α5链正常也不能排除遗传性肾脏疾病的可能，但是Ⅳ型胶原α5链异常仍然是诊断遗传性肾脏疾病的重要手段。目前，市场上有两个公司提供检测Ⅳ型胶原α5链抗原，既往研究也以这两家公司的抗体为主，我们的目的是检验和比较Cosmo公司与Wieslab公司Ⅳ型胶原α5抗体在AS患者肾组织及皮肤组织的染色差异，为实际工作提供帮助。

材料和方法

肾活检和皮肤活检选择2013年1～3月在南京军区南京总医院肾脏科住院行肾活检的患者26例，所有患者肾脏冰冻组织均行Ⅳ型胶原α5链染色，其中15例患者同时接受皮肤活检，皮肤组织行石蜡包埋。所有标本利用两家公司的抗体平行比较，单克隆鼠抗人Ⅳ型胶原α5抗体(Wieslab 克隆号ALP105)用间接免疫荧光法，单克隆鼠抗人Ⅳ型胶原α5抗体(Cosmo BioUSA 克隆号CFT-45325)用直接免疫荧光法。

Wieslab间接免疫荧光法3 μm冰冻切片，吹干30 min，PBS冲洗10 min，单克隆鼠抗人Ⅳ型胶原α5抗体(Wieslab克隆号ALP105)1∶40，室温孵育2h，PBS冲洗5 min，切片滴加FITC标记的兔抗鼠免疫球蛋白IgG(Dako)，室温孵育30 min，水洗，干燥，水性甘油封片。……