TUNEL法和SCGE法评价奶牛性控冻精DNA损伤
2014-03-21骆新荣贾发青高庆华韩春梅
郑 飞 骆新荣 贾发青 高庆华, 韩春梅,*
(1 塔里木大学动物科学学院, 新疆 阿拉尔 843300)(2 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室, 新疆 阿拉尔 843300)
前言
性控冻精的产业化应用对畜牧业发展,特别是奶牛业的发展产生了重大而深远的影响。随着性控冻精生产技术的日渐成熟,性控冻精也逐步向茸鹿、奶山羊等限性性状家畜广泛推广。在未来的现代化畜牧业,性控冻精将有可能替代常规冻精,使家畜品种改良,品系化杂交繁育进入一个全新的时代。
在性控冻精在制作过程中,精液的处理会对精子产生各种影响,从而造成精子DNA的较大程度损伤[1,2],由于受精时不完全依赖于精子DNA完整性,即便是DNA受损的精子仍可保持受精潜能,产生表型健康的性控后代,但性控冻精DNA损伤会对后代的遗传稳定性的产生远期影响,即使受精后损伤的DNA有一定的自修复能力[1]。因此,性控冻精的生物安全性应被关注。
TUNEL法(terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling, 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法)是检测细胞凋亡早期过程中细胞核DNA完整性的有效方法。单细胞凝胶电泳(single single-cell gel electropherosis,SCGE)又称彗星法,是一种比较灵敏简便的检测DNA损伤程度的方法。本实验通过TUNEL法和SCGE法分别对性控冻精DNA的完整性进行检测,对比两种方法检测结果对性控冻精DNA的损伤程度的评价。
1 材料与方法
1.1 实验材料
X/Y种畜(天津)有限公司生产规格为0.25 mL的性控奶牛细管冻精,种公牛号分别为12200145、12200171、12200176,精子数约230万,活率40~45%。三头公牛常规冻精每管精子数2 000万,活率35~40% 。……
