葛 畅 许春伟 王鲁平 方 园 张玉萍

北京军区总医院病理科，北京100700

5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中Wif-1基因甲基化状态、m RNA表达及蛋白表达的影响

葛 畅 许春伟 王鲁平 方 园 张玉萍

北京军区总医院病理科，北京100700

目的探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷（5'-Aza-2'-deoxycytidine，5'-Aza-CdR）对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。方法用不同浓度（0.5、1.0、1.5μmol/L）5'-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中Wif-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-Aza-CdR处理后Wif-1基因mRNA和蛋白重新表达，实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR（0.5、1.0、1.5μmol/L）在HT-29细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.207±0.052）、（1.790±0.033）和（2.016±0.123）；在LoVo细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.294±0.048）、（1.893±0.061）和（2.204±0.041）。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为（0.456±0.040）、（0.511±0.025）、（0.857±0.031）和（0.934±0.047）；LoVo细胞株相对表达量分别为（0.842±0.032）、（0.844±0.044）、（0.854±0.037）和（0.856±0.034）。以上作用均呈时间、剂量依赖性，Wif-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义（F=144.823，P=0.000；F=476.195，P=0.000）。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义（F= 129.674，P=0.000），但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义（F=0.117，P=0.948）。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因的甲基化状态，并能恢复mRNA及蛋白重新表达。

DNA甲基化；5'-Aza-CdR；HT-29；LoVo；Wif-1基因

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）作为最常见恶性肿瘤之一，其发病率仅位于肺癌和前列腺癌（女性为乳腺癌）之后，居第3位，而每年CRC病死率约占全部恶性肿瘤死亡总人数的8%，在恶性肿瘤死因中居第4位[1]。……