祁秀玲 于永军 王晓琦 孙会昌 刘清新 于 娜

1.沧州医学高等专科学校，河北沧州061000；2.河北省沧州市食品药品检验所，河北沧州061000

香黄通便胶囊中木香烃内酯、去木香烃内酯含量测定的研究

祁秀玲1于永军1王晓琦2孙会昌2刘清新1于 娜1

1.沧州医学高等专科学校，河北沧州061000；2.河北省沧州市食品药品检验所，河北沧州061000

目的采用高效液相色谱法，对香黄通便胶囊中木香烃内酯、去木香烃内酯进行含量测定研究。方法①高效液相色谱法：检测木香烃内酯、去木香烃内酯的含量。参考文献选择合适的固定相，调整流动相组成、配比、流速以及柱温，在最大吸收波长下测定，使指标峰分离完全，理论塔板数符合要求。②线性范围考察：配制系列浓度的对照品溶液，以色谱峰的峰面积为纵坐标，以进样浓度为横坐标，进行线性回归，得回归曲线并考察线性范围。③方法学考察：分别考察测定方法的重复性、重现性、耐用性、稳定性和加样回收率。④样品含量测定：取三批样品分别按上述方法测定指标成分的含量。结果香黄通便胶囊中木香烃内酯、去木香烃内酯色谱条件为：Agilent Zorbax SB-C18色谱柱，流动相：甲醇-水（65∶35，V/V），流速：0.8 mL/min，柱温：25℃，检测波长：225 nm。木香烃内酯、去木香烃内酯分别在14.4～216.0 μg/mL、28.0～421.2 μg/mL范围内线性关系良好，r分别为0.9996、0.9999。该方法重复性、重现性、耐用性、在12h内稳定性的RSD分别为0.77%、0.30%，0.05%、0.59%，0.88%、1.30%，1.54%、0.43%。三个浓度（80%、100%、120%）的加样回收率为99.2%、102.9%，100.9%、101.8%，97.5%、100.5%，RSD分别为0.84%、0.31%，0.20%、1.70%，0.18%、0.12%。样品中木香烃内酯、去木香烃内酯总含量不低于4.22 mg/粒。结论以木香烃内酯、去木香烃内酯作为含量测定指标，采用高效液相色谱法进行检测，准确度高，专属性强，重现性好。

香黄通便胶囊；含量测定；高效液相色谱法；木香烃内酯；去木香烃内酯

香黄通便胶囊是在临床经验方的基础上研制开发成的中药复方制剂，由大黄、木香、盐知母、盐黄柏等十一味中药材组成，具有清热散结、顺气导滞、健脾消食、润肠通便的作用，用于热结津伤、气滞脾虚导致的便秘。木香是处方中主要药味[1]，故对木香中所含主要活性成分木香烃内酯和去木香烃内酯进行含量测定研究[2]，以控制制剂质量，保证药品安全有效[3]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

XS105型电子分析天平（万分之一），AS312O型超声波清洗仪（天津奥特塞恩斯有限公司），LC-2010AHT230V液相色谱仪（日本岛津），8453型紫外分光光度计（安捷伦），Agilent 1260，Agilent Zorbax SBC18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。

1.2 试药

香黄通便胶囊（自制，规格为0.5 g/粒，批号为2013 0401、20130501、20130502、20130503），木香烃内酯（中国药品生物制品检定所，批号为111524-201208，纯度为99.5%），去木香烃内酯（中国药品生物制品检定所，批号为111525-201008，含量以100%计），甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取胶囊内容物，研细，取1 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min，放冷，再称重，甲醇补充重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作供试品溶液[4-6]。

2.2 对照品溶液的制备

取木香烃内酯、去木香烃内酯，加甲醇，制成浓度分别为38、82 μg/mL的混合对照品溶液[7]。

2.3 阴性样品液的制备

取不含木香的阴性制剂，照供试品溶液的制备方法制备，作为阴性样品溶液。

2.4 色谱条件[8-10]

将对照品溶液在190～320 nm范围内扫描，得扫描曲线，见图1、2。选择合适的固定相，调整流动相的组成、配比、流速以及柱温，在最大吸收波长处测定，使指标峰分离完全、理论塔板数符合要求。

试验可知大木香烃内酯、去木香烃内酯在225 nm波长处均有较大吸收，且基线平稳。使用Agilent 1260，色谱柱，流动相：甲醇-水（65∶35），流速为0.8 mL/min，柱温为25℃时，木香烃内酯、去木香烃内酯各峰与其他峰分离良好，分离度大于1.5，阴性对照实验表明其他组分峰对上述峰无干扰，理论塔板数按大黄素计不低于3000。色谱见图3、4、5。

图1 木香烃内酯的最大吸收波长扫描图

图2 去木香烃内酯的最大吸收波长扫描图

图3 木香烃内酯、去木香烃内酯标准品的高效液相色谱图

2.5 线性关系的考察

图4 样品中木香烃内酯、去木香烃内酯的高效液相色谱图

图5 阴性样品木香烃内酯、去木香烃内酯的高效液相色谱图

取混合对照品溶液（38、82 μg/mL），分别进样2、5、10、15、20、30 μL，测定吸收峰，分别以木香烃内酯、去木香烃内酯进样量为横坐标，所对应的峰面积为纵坐标，进行线性回归，峰面积对木香烃内酯、去木香烃内酯的回归方程为y=240.91x-57.938，y=237.53x-33.251。r分别为0.9996、0.9999，木香烃内酯、去木香烃内酯在14.4～216.0 μg/mL、28.0～421.2 μg/mL范围内线性关系良好。

2.6 重复性考察

取同一批样品，按相同制备方法制备6份供试品溶液，进样，测定峰面积，计算木香烃内酯、去木香烃内酯峰面积的RSD为0.77%、0.30%。

2.7 稳定性考察

取供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8、10、12 h测定峰面积，计算木香烃内酯、去木香烃内酯峰面积的RSD为1.54%、0.43%。样品溶液在12 h稳定。

2.8 加样回收率

取已知含量的样品6份，各约0.25 g，精密称定，分别各加入80%、100%、120%的木香烃内酯对照品溶液（0.12 mg/mL），去木香烃内酯对照品溶液（0.234 mg/mL），加甲醇制成25 mL，进样，测定加样回收率，见表1。计算可知，样品的平均回收率为99.2%、102.9%，100.9%、101.8%，97.5%、100.5%，RSD为0.84%、0.31%，0.20%、1.70%，0.18%、0.12%。

表1 木香烃内酯、去木香烃内酯的加样回收率测定结果

2.9 耐用性试验

分别采用依特利（4.6 mm×150 mm，5 μm）色谱柱，Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色谱柱，考察不同牌号色谱柱对色谱峰的影响，结果表明，木香烃内酯、去木香烃内酯各峰与其他峰分离度均＞1.5，理论塔板数均＞4000，测试结果RSD为0.88%、1.30%。

2.10 重现性试验

两人在不同实验室使用不同的液相色谱仪及色谱柱测定同一批样品，计算RSD为0.05%、0.59%。

2.11 样品测定

按确定的上述含量测定方法，测定3批样品中木香烃内酯、去木香烃内酯的含量，结果见表2。

表2 木香烃内酯、去木香烃内酯的含量测定（mg/粒）

通过3批样品的测定，可知木香烃内酯、去木香烃内酯含量总和平均为5.2932 mg/粒，考虑到药材的差异，制备过程中的差异，测量中的误差，确定香黄通便胶囊中木香烃内酯、去木香烃内酯总含量限度指标下浮20%，即不小于4.22 mg/粒[12]。

3 讨论

木香是处方中的主要成分[11]，参照木香药材的含量测定方法，制定了复方制剂中木香烃内酯和去木香烃内酯的含量。本研究选择了甲醇-水（65∶35），保留时间适宜，分离度及理论塔板数均符合要求。木香烃内酯及去木香烃内酯需冷冻保存，故对照品液应新鲜配制，同时柱温设定在室温。中药制剂不同于化药制剂，药材有效成分含量差异较大，生产过程影响因素较多，因此在制订质量标准时，含量指标的确定以三批样品含量平均值下浮20%作为控制指标。

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The study of determination of Costunolide and Dehydrocostuslactone in Xianghuangtongbian Capsule

QI Xiuling1YU Yongjun1WANG Xiaoqi2SUN Huichang2LIU Qingxin1YU Na1
1.Cangzhou Medical College,Hebei Province,Cangzhou061000,China;2.Cangzhou Institute for Food and Drug Control,Hebei Province,Cangzhou061000,China

ObjectiveTo measure the content of Costunolide and Dehydrocostus lactone in Xianghuangtongbian Capsule by using highly-effective liquid chromatography.Methods①HPLC:The contents of Costunolide and Dehydrocostus lactone was detected separately.Proper stationary phase was chosed,the makeup,matching,flow rate and column temperature of mobile phase was adjusted,in the condition of wavelength(nm)max,the absorption peaks were separated completely,the theoretical plate number meet the standard.②Linearity range investigation:Reference substance solution of different concentration were confected,the linear regression was performed with chromatographic peak area as y-axis and sampling concentration as x-axis,the curvilinear regression was to get,and the linearity range was investigated.③Methodological investigation:the repeatability,reproducibility,durability,stability and sample recovery rate of the method were investigated.④Sample content determination:determining the content of index components in three groups of samples according to the methods mentioned above.ResultsThe concentration of Costunolide and Dehydrocostus lactone in Xianghuangtongbian Capsule was determined using a HPLC system at the wavelength of 225 nm.The separation was achieved by using a Agilent Zorbax SB-C18,at a rate of 0.8 mL/min.The temperature of column was 25℃.The mobile phase consisted of methyl alcohol and water at a ratio of 65∶35(V/V),Costunolide and Dehydrocostus lactone had a good linear relationship among 14.4-216.0 μg/mL,28.0-421.2 μg/mL.r was 0.9996 and 0.9999.The RSD%of repeatability,reproducibility,durability,the stability within 12 hours and analytical recovery were 0.77%,0.30%;0.05%,0.59%;0.88%,1.30%;1.54%, 0.43%.The analytical recovery of three different concentration was 99.2%,102.9%;100.9%,101.8%;97.5%,100.5%,with RSD was 0.84%,0.31%;0.20%,1.70%;0.18%,0.12%.It was no less than 4.22 mg mg in per granule of the total content of Costunolide and Dehydrocostus lactone.ConclusionRegard Costunolide and Dehydrocostus lactone as a target of determining the content,using highly-effective liquid chromatography to measure it,the accuracy is high, the specificity is better,the reproducibility is good.

Xianghuangtongbian Capsule;Content measuring;HPLC;Costunolide;Dehydrocostuslactone

R927.2

A

1673-7210（2014）04（c）-0095-04

2013-11-19本文编辑：卫轲）

河北省科学技术研究与发展计划项目（编号12272507）。

祁秀玲（1966.12-），女，河北东光人，硕士，副教授，高级工程师，沧州医学高等专科学校药学系药剂教研室主任；研究方向：药物制剂技术。