牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测方法的建立及初步应用

2014-03-13王嵩林红丽王宇鹏刘振格王杰杨明发余丽芸侯喜林

黑龙江八一农垦大学学报 2014年3期

王嵩，林红丽，王宇鹏，刘振格，王杰，杨明发，余丽芸，侯喜林

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319；2.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院）

牛传染性鼻气管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious Bovine Rhinotracheitis virus，IBRV）引起的牛的一种急性、热性、接触性传染病[1]。该病是我国进出境动物和国际动物贸易中规定的重点检疫对象[2]。

20世纪50年代在美国首次发现本病并分离到病毒[3]。我国于20世纪70年代在进口牛群中发现该病毒，20世纪80年代分离到病毒。目前我国一些地区的牛群中有此病毒感染，且有逐渐上升的趋势，给养牛业造成了严重危害[4]。研究拟根据GenBank中登陆的IBRV保守基因gB序列[5]，利用本实验室分离鉴定的IBRV DQ株建立快速、准确、高效的诊断IBRV的PCR方法，为该病的临床检疫工作提供实用的技术手段。

1 材料和方法

1.1 病毒和细胞

牛传染性鼻气管炎病毒DQ株（IBRV DQ）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV HJ株）和牛副流感病毒3型（BPIV-3 DQ株）由黑龙江八一农垦大学传染病实验室分离保存；牛肾细胞（MDBK）和非洲绿猴肾细胞（Vero）购自中国科学院上海细胞库。

1.2 主要试剂

M-MuLV反转录酶（200 U·μL-1）、HPR IRNA酶抑制剂（40 U·μL-1）、dNTP（10mmol·μL-1）购于Promega公司；TaKaRa Taq酶（5 U·μL-1）、10×PCR Buffer、dNTP（2.5mmol·L-1）、DNA Marker DL2000购于TaKaRa公司；DMEM培养基、胰蛋白酶购于Invitrogen公司；胎牛血清购于法国 PAA Laboratories；二甲基亚砜（DMSO）购于上海华舜生物公司；DEPC水购于江苏省碧云天生物技术研究所；琼脂糖购于哈尔滨宝泰克生物科技有限公司；其他化学试剂为进口或国产分析纯级。