冯雪婷，刘素丽，黄潇，王云康，龙军，金亮，曹荣月*

（1. 中国药科大学生命科学与技术学院，江苏 南京210009；2. 江苏未名生物医药有限公司，江苏 常州 213000 ；3. 南京中医药大学生命科学与技术学院，江苏 南京 210046）

·药学研究·
PHARMACEUTICAL RESEARCH

重组猪源胰蛋白酶原的构建、表达与活性分析

冯雪婷1,2，刘素丽2，黄潇2，王云康1，龙军3，金亮1，曹荣月1*

（1. 中国药科大学生命科学与技术学院，江苏 南京210009；2. 江苏未名生物医药有限公司，江苏 常州 213000 ；3. 南京中医药大学生命科学与技术学院，江苏 南京 210046）

目的：构建、表达重组猪源胰蛋白酶原，并对其进行分离纯化和酶活性分析。方法：利用大肠埃希菌表达系统（pET-28a，宿主菌BL21 DE3）优化天然猪源胰蛋白酶原基因，经乳糖诱导表达重组胰蛋白酶原蛋白，采用阴离子交换色谱法分离纯化，以SDS-PAGE电泳鉴定目标蛋白，以紫外分光光度法检测重组蛋白的酶活力。结果：测序结果表明，重组猪源胰蛋白酶原基因工程菌构建成功，SDS-PAGE检测显示目的蛋白条带位置与标准猪源胰蛋白酶条带位置一致，且酶活力可达513.09 U•mg-1。结论：成功获得了重组猪源胰蛋白酶原，且酶活力较好，为进一步研究生产提供了基础。

猪源胰蛋白酶原基因；包涵体变性；乳糖诱导；稀释复性

胰蛋白酶(trypsin，EC3.4.21.4)属于丝氨酸蛋白酶的一种，在胰脏中以胰蛋白酶原的前体形式被合成和分泌。胰蛋白酶原与胰蛋白酶的结构中均存在一个对Ca2+高度亲和的部位，其对胰蛋白酶原的激活及胰蛋白酶活性状态的保持非常重要[1]。在Ca2+的存在下，胰蛋白酶原被肠激酶或有活性的胰蛋白酶激活，形成活化胰蛋白酶[2]，后者作为肽链内切酶，对多肽链中赖氨酸或精氨酸羧基所形成的肽键呈高度专一性，可水解该肽键产生以碱性氨基酸为羧基末端的小分子肽。……