杨 滢

(河南中医学院第一附属医院，河南 郑州 450000)



不同性状款冬花的化学成分比较

杨 滢

(河南中医学院第一附属医院，河南 郑州 450000)

在中药材的等级划分过程中，性状特征是重要的依据之一。传统用药经验认为，紫色款冬花花蕾的药用价值高于黄色款冬花的花蕾。通过对款冬花代谢活动的测定可以得出不同性状款冬花所含的主要化学成分，以此来确定二者的临床药用价值。通过实验方法测定不同性状款冬花主要成分，并通过主要成分的不同来判定其药用价值的差异。

款冬花；紫色；黄色；花蕾；化学成分

款冬花是菊科植物款冬的花蕾，也可以叫做冬花，是唯一一种菊科款冬属植物，主要分布在我国的山西、河北、陕西以及内蒙古等地区。据《本草纲目》记载，款冬花具有止咳化痰、润肺下气的功效，可以治疗喉痹以及咳逆上气善喘等疾病。现代临床多将款冬花用于喘咳痰多、久咳以及劳嗽咳血等疾病的治疗中。为深入了解款冬花的药用价值，笔者利用NMR法探析测定不同性状款冬花的化学成分并进行比较，并从化学角度对款冬花药用等级划分的科学性加以验证。

1 实验测定过程

1.1 材料准备

本研究共采集四种不同性状的款冬花，分别来自四个不同的产地。通过手工挑选的方式将四种不同性状款冬花的花蕾摘下，按照紫色与黄色加以区分。

1.2 仪器和试剂

研究使用德国布鲁克公司制造的质子频率为600.13 MHz的600 兆核磁仪；所需试剂为3-三甲基硅基、氘代氢氧化钠、氘代丙酸钠、质量分数为99.8%的氘代氯仿、氘代甲醇以及NMR试剂重水。

1.3 样品制备

准确秤取200mg的款冬花样品粉末置于10mL的离心管内，甲醇与蒸馏水各加入1.5mL，然后加入3mL氯仿，将其混合均匀。执行超声提取操作25min，之后进行离心，速度为3 500r/min，时间在25min左右。离心之后，提取液会分为上下两层，然后将其转移到25mL的圆底烧瓶内进行减压，使其浓缩蒸干。之后将其溶解于NMR试剂中，下层的氯仿相使用800μL的CDCl3进行溶解，上层的甲醇水相部分则使用400μL的氘代甲醇以及400μL的缓冲重水进行溶解，溶解后再次进行离心，10min以后取600μL上层清液放置于核磁管中待测。

1.4 测定过程

测定频率为仪器的额定频率600.13MHz，谱宽为12345.679Hz，傅里叶变换为0.188Hz，共扫描64次，脉冲的间隔时间为1s，温度设定为25℃。采用手动方式进行基线和相的调节以及峰的校正。在核磁测定甲醇水相提取物的过程中，采用noesyppr1d 序列来压制水峰，并使用氘代甲醇来锁场，使用TSP作为内标。核磁测定氯仿相提取物的过程中，采用的是zg30序列，使用氘代氯仿来锁场，内标使用的是TMS。

2 实验结果分析

2.1 实验数据处理

采用MestReNova对得到的核磁图谱进行处理，在δ0.54～10.02分段内进行积分。而甲醇水相核磁图谱中的δ4.70～5.02段属于残余水峰，δ3.30～3.38属于残余甲醇峰，因此不需要进行积分；氯仿相所得到的核磁图谱中，δ7.22～7.30属于残余氯仿峰，也不需要积分。将积分得到的结果进行归一化处理，然后利用SIMCA-P13.0软件来分析款冬花的主要化学成分，并通过正交偏最小二乘法以及偏最小二乘法对成分进行判别分析。

2.2 实验数据分析

本次实验结果得到了款冬花的40多种代谢产物，由于信息比较复杂，因此决定采用多元统计分析方法来比较不同性状款冬花化学成分的不同，步骤如下：

2.2.1 款冬花主成分的分析过程 对款冬花紫色与黄色花蕾的甲醇水相提取物进行PCA分析，由主成分23.0%的PC1和20.3%的PC2所构建出的得分图显示，紫色和黄色款冬花花蕾呈现分开的趋势，并且组间差异较大，表明两组花蕾的代谢情况存在明显差异，主成分差异很大。通过氯仿相散点图我们可以知道，两种不同性状款冬花非极性成分的差异也比较大。在PCA分析方法下得到的数据为最原始状态，可以判定样品的组别关系和自然分布情况，但可能会存在组内误差，为进一步确定两种不同性状款冬花化学成分的不同，本研究继续采用OPLS-DA和PLS-DA这两种方法来分析实验数据。

2.2.2 OPLS-DA分析 OPLS-DA分析法可以确定出紫色与黄色花蕾化学成分的差异，因此在确定二者化学成分存在差异之后，就可以采用OPLS-DA分析法将二者间的差异成分确定出来。通过对两种不同性状款冬花花蕾甲醇水相以及氯仿相进行OPLS-DA分析我们得到：紫色款冬花花蕾主要含有脯氨酸、马来酸、磷脂酰胆碱、苏氨酸、α-葡萄糖、醋酸、肌酐、3, 4-二咖啡酰奎尼酸、延胡索酸、4, 5-二咖啡酰奎尼酸、咖啡酸、芦丁、3,5-二咖啡酰奎尼酸、对羟基苯甲酸、山柰酚类似物、腺嘌呤、芥子酸、款冬酮、甲酸、腺嘌呤核苷、16α-diol以及bauer-7-ene-3β等成分，并且含量较高；而黄色花蕾的款冬花中则主要以琥珀酸、蔗糖、乙醇胺、柠檬酸以及脂肪酸类物质为主要成分。经t检验，两种不同性状款冬花中的脯氨酸、醋酸、咖啡酸、3, 4-二咖啡酰奎尼酸、EMDNT、16α-diol以及bauer-7-ene-3β等成分存在明显差异性；而磷脂酰胆碱、肌酐、苏氨酸、马来酸、4, 5-二咖啡酰奎尼酸、芦丁、3, 5-二咖啡酰奎尼酸、腺嘌呤、山柰酚类似物、款冬酮以及腺嘌呤核苷等物质的差异则更加明显。

2.3 实验结果谈论

核磁仪的测定以及OPLS-DA分析证实，紫色与黄色款冬花的主要化学成分差异较大，尤其是磷脂酰胆碱、肌酐、苏氨酸、马来酸、4, 5-二咖啡酰奎尼酸、芦丁、3, 5-二咖啡酰奎尼酸、腺嘌呤、山柰酚类似物、款冬酮以及腺嘌呤核苷等物质，差异非常明显。由于芦丁、3, 5-二咖啡酰奎尼酸以及款冬酮等成分具有较好的抗病毒、抗氧化以及镇痛作用，而咖啡酸及绿原酸类则具有较好的抗病毒、抗菌以及抗肿瘤等效用，款冬酮可以升压和兴奋作用，因此可以通过间接或者协同方式发挥止咳化痰作用。也由此可知，不同性状的款冬花由于主要成分不同，因此药用价值也存在一定差异。

3 结语

综上所述，不同性状款冬花的主要成分确实存在一定差异，也因此决定了二者在药用价值上的差异。在临床用药中，需要根据款冬花成分以及主要成分的作用来确定其用途。

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(责任编辑：姜付平)

2014-03-12

杨滢(1982-)，河南中医学院第一附属医院药师，研究方向为医院药学。

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1673-2197(2014)11-0015-01