路 云，黄国英，田俊梅，张 健

（山东齐都药业有限公司，山东淄博255400）

HPLC法测定消旋卡多曲分散片的有关物质

路 云，黄国英，田俊梅，张 健

（山东齐都药业有限公司，山东淄博255400）

目的建立高效液相色谱法测定消旋卡多曲分散片的有关物质。方法采用C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈－磷酸二氢钾（取磷酸二氢钾1 g与磷酸1 mL，加水溶解并稀释至1 000 mL）为流动相，梯度洗脱；检测波长为210 nm。结果各杂质在0.5～16μg·mL－1范围内呈良好的线性关系，平均回收率均在90%～110%之间。结论本方法稳定，操作简单，重现性好，可以有效控制消旋卡多曲分散片中有关物质的量。

高效液相色谱法；消旋卡多曲；有关物质

消旋卡多曲是一种新的作用机制的抗腹泻药［1］，几乎没有以往抗腹泻药物普遍存在的副作用［2］，而治疗效果与临床常规用药洛派丁胺相当。它是一种脑啡肽酶的抑制剂［3～5］，具有较高的特异性抗分泌作用。它通过抑制脑啡肽酶活性，进而抑制水和电解质过度分泌来发挥其抗腹泻作用。它的特点是：高效、作用迅速、治疗指数高，对中枢神经系统、呼吸系统、心血管系统、内分泌系统无明显作用，不引起便秘，是一种安全、有效地抗腹泻药。

消旋卡多曲分散片用药人群为成人［6］和儿童急性腹泻患者［7］。分散片作为一种固体速释制剂与普通片相比，具有以下优点：分散状态佳、崩解时间短、药物溶出迅速；吸收快、生物利用度高；服用方便，可吞服、咀嚼含吮或用水分散后服用，尤其适合老、幼和吞服固体困难的患者。本品制成分散片，在急性腹泻发作时服用可以迅速起效，有效地控制病情，迅速减轻患者的痛苦。

消旋卡多曲国内标准［8］只对未知单一杂质和总杂质进行了控制；欧洲药典委员会消旋卡多曲标准中对已知杂质A、C、E、F、未知单一杂质及总杂质进行了控制；为了更好地控制产品质量，我们参照欧洲药典委员会消旋卡多曲质量标准对原有质量标准进行了提高和改进，除未知单一杂质和总杂质外，控制了A、C、E、F、G五个已知杂质。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC－20A高效液相色谱仪，CPA－225D电子天平。

1.2 试药 对照品：杂质A：生产单位：欧洲药典委员会；批号：2.0；杂质C：生产单位：TLC Pharmachem；批号：1469－011A2；杂质E：生产单位：Toronto Research Chemicals Inc；批号：7－RCD－20－1；杂质F：生产单位：Cato Research Chemicals Inc；批号：R121128－06；杂质G：生产单位：欧洲药典委员会；批号：1.0；供试品：130501、130502、130503。乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）；流动相：以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1 g与磷酸1 mL，加水溶解并稀释至1 000 mL）为流动相A，以乙腈为流动相B，照下表进行梯度洗脱；流速为1.0 mL·min－1，检测波长为210 nm，柱温为30℃，进样量10μL。

时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%）0～5 60 40 5～20 60→20 40→80 20～45 20 80 45～54 60 40

2.2 检测波长的选择 精密称取消旋卡多曲对照品适量，用混合溶剂（流动相A∶流动相B＝1∶1）制成每1 mL中含约50μg的溶液，精密称取杂质A、C、E、F、G各适量，分别加混合溶剂制成每1 mL中各含约15μg的溶液，照紫外－可见分光光度法，在200～400 nm的波长范围内扫描，在210 nm波长处有较大吸收，且结合本品的破坏试验，其产生的杂质在210 nm均能被检出，而辅料不干扰测定，所以选用210 nm作为有关物质的测定波长，见图1～5。

图1 杂质A紫外扫描图谱

图2 杂质C紫外扫描图谱

图3 杂质E紫外扫描图谱

图4 杂质G紫外扫描图谱

图5 杂质F紫外扫描图谱

2.3 专属性试验

2.3.1 空白辅料干扰试验 称取本品处方量的空白混合辅料，用混合溶剂制成约相当于消旋卡多曲2 mg·mL－1的溶液，滤过，作为空白辅料溶液，记录色谱图。空白辅料不干扰测定，见图6。

2.3.2 酸破坏试验 精密称取本品细粉适量（约相当于消旋卡多曲50mg），加入1mL 1mol·L－1盐酸溶液，水浴加热10 min，放冷至室温，加入氢氧化钠溶液中和，用混合溶剂定容至25 mL，滤过，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。各色谱峰之间分离度良好，见图7。

2.3.3 碱破坏试验 精密称取本品细粉适量（约相当于消旋卡多曲50mg），加入0.2 mL 1 mol·L－1氢氧化钠溶液，水浴加热5 min，放冷至室温，加入盐酸溶液中和，用混合溶剂定容至25 mL，滤过，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。各色谱峰之间分离度良好，见图8。

2.3.4 氧化破坏试验 精密称取本品细粉适量（约相当于消旋卡多曲50 mg），加入2 mL 30%过氧化氢溶液，置水浴中加热20 min，放冷至室温，用混合溶剂定容至25 mL，滤过，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。各色谱峰之间分离度良好，见图9。

2.3.5 光照破坏试验 精密称取本品细粉适量（约相当于消旋卡多曲50 mg），置4 500 Lx光照强度下放置40 h，用混合溶剂定容至25 mL，滤过，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。各色谱峰之间分离度良好，见图10。

2.3.6 高温破坏试验 精密称取本品细粉适量（约相当于消旋卡多曲50 mg），置25 mL量瓶中，置100℃烘箱中加热8 h，放冷至室温，用混合溶剂定容至25 mL，滤过，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。各色谱峰之间分离度良好，见图11。

综上所述，破坏产生的新杂质与消旋卡多曲主峰均能够完全分离，表明本方法专属性较强，能够对消旋卡多曲分散片进行杂质检查。

2.4 溶液稳定性试验 精密制成含消旋卡多曲2mg·mL－1，杂质A、C、E、F、G 10μg·mL－1的溶液。于室温暗处放置，分别于0、3、6、9、12 h，精密量取10μL，记录色谱图。12 h内消旋卡多曲及各杂质峰面积的RSD%均小于5.0%，结果表明本品溶液于室温暗处放置12 h内相对稳定。

图6 空白辅料试验图谱

图7 酸破坏试验图谱

图8 碱破坏试验图谱

图9 氧化破坏试验图谱

图10 光照破坏试验图谱

图11 高温破坏试验图谱

2.5 定量限试验 杂质E、F定量限：精密量取杂质E、F对照品约13.5 mg，加混合溶剂稀释制成0.27μg·mL－1的溶液；杂质A、C、G定量限：精密量取杂质A、C、G杂质对照品约13 mg，加混合溶剂稀释制成0.65μg·mL－1的溶液；精密量取上述溶液10μL，记录色谱图，图谱中各已知杂质的信噪比约为10∶1，计算得各已知杂质的定量限分别为0.65、0.65、0.27、0.27、0.65μg·mL－1。

2.6 检测限试验 杂质E、F检测限：精密量取杂质E、F定量限试验用溶液3 mL，置10 mL量瓶中，制成0.08μg·mL－1的溶液；杂质A、C、G检测限：精密量取杂质A、C、G定量限试验用溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加混合溶剂制成0.20μg·mL－1的溶液；精密量取上述溶液各10μL，记录色谱图，图谱中各已知杂质的信噪比均约为3∶1，计算得各已知杂质的检测限分别为0.20、0.20、0.08、0.08、0.20μg·mL－1。

2.7 线性关系试验 精密称取杂质A、C、E、F、G各适量，制成每1 mL中约含20μg的混合溶液，作为线性关系试验贮备溶液，精密量取贮备液适量，制成浓度分别为16、8、4、2、1、0.5μg·mL－1的系列线性试验溶液。结论：杂质A、C、E、F、G在0.5～16 μg·mL－1的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。见表1。

表1 各杂质标准曲线及线性浓度范围

2.8 回收率试验 精密称取杂质A、C、E、F、G各适量，制成每1 mL中各约含50μg的混合溶液，作为杂质对照品贮备液；分别取消旋卡多曲分散片细粉（约相当于消旋卡多曲50 mg），置25 mL量瓶中，共配制9份，其中3份精密加入杂质对照品贮备液2 mL，3份精密加入杂质对照品贮备液5 mL，3份精密加入杂质对照品贮备液6 mL，用混合溶剂定容，滤过，精密量取10μL，记录色谱图。各杂质的平均回收率均在90%～110%，准确度良好，见表2。

表2 回收率测定结果

2.9 耐用性试验 精密称取本品细粉适量（约相当于消旋卡多曲50 mg），置25 mL量瓶中，分别加入回收率试验中杂质A、C、E、F、G贮备液各2.5 mL，用混合溶剂定容，滤过。分别考察柱温、不同批次色谱柱、流速的微小变化，对杂质测定的影响。各测试条件下各杂质均达到基线分离，含量的RSD%均小于2.0%，可见该方法的耐用性试验良好。

2.10 3 批样品有关物质的测定结果 分别精密称取杂质A、C、E、F、G对照品各适量，用混合溶剂溶解并稀释制成每1 mL中各约含10μg的混合溶液作为对照品溶液。取消旋卡多曲分散片细粉制成含消旋卡多曲2 mg·mL－1的溶液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用混合溶剂定容，作为对照溶液。分别取上述三种溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的两倍，按外标法以峰面积计算，结果见表3、图12。

表3 样品有关物质检查结果

图12 样品检测试验图谱

3 讨论

3.1 药品的有关物质与药品质量、安全性及效能密切相关，有关物质的控制越来越受到重视。因此，制定一个有效测定杂质的方法很重要。

3.2 国产消旋卡多曲标准（标准号：H20074072）杂质水平及质控标准评价：对本文中有关物质方法的定量分析表明，本方法杂质控制水平良好，符合药典相关要求，但国产消旋卡多曲标准（标准号：H20074072）方法系统适用性要求低，色谱条件差，等度洗脱方法不能使杂质得到有效分离。采用本文梯度洗脱方法，可以使消旋卡多曲及其杂质得到很好的分离，见图13～14。

图13 采用等度洗脱方法图谱

3.3 通过对消旋卡多曲原料杂质谱分析，杂质G为降解杂质，必须对其进行控制。因此，我们在欧洲药典委员会消旋卡多曲标准的方法基础上增加了对杂质G的控制。

3.4 在本文的色谱条件下消旋卡多曲分散片经光、热、酸、碱、氧化破坏后，各降解产物色谱峰与主成分色谱峰均能达到基线分离，能有效地检出消旋卡多曲分散片中各已知杂质。考察及样品的测定结果显示，本法操作简便快捷，专属性强，结果准确可靠，可有效地控制本品的质量。

图14 采用梯度洗脱方法图谱

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Determ ination of the related substances in Racecadotril Dispersible Tablets by HPLC

LU Yun，HUANGGuo-ying，TIAN Jun-mei，ZHANG Jian
（Shandong Qidu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zibo 255400，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of related substances in Racecadotril Dispersible Tablets.MethodsThe isolation was executed by a ODS column（4.6 mm×250 mm，5μm）and mobile phase was acetonitrile－potassium dihydrogen phosphate，gradient elution；The detection wavelength was 210 nm.ResultsEach impurity showed a good linear relationship within 0.5～16μg·mL－1.The average recovery was between 90%to 110%.ConclusionThemethod was stable，simple and repeatable，and can be used for the quality control of the related substances in Racecadotril Dispersible Tablets.

HPLC；Racecadotril；Related substances

R927.1

A

2095－5375（2014）08－0449－005

路云，女，研究方向：药物分析，E－mail：qdrdluyun＠163.com